[생화학 실습] BCA assay

소개글

BCA원리와 실제실험과정 결과분석까지 기술되었습니다 실제레포트작성에 많은 도움이 될 것입니다

목차

1. Subject
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

2. Introduction

(1) 단백질 정량
①ninhydrin 반응
아미노산과 ninhydrin을 가열 반응시키면 아미노산의 산화분해가 일어나 환원된 ninhydrin과 암모니아, 이산화탄소, aldehyde가 생성되며 다음에 환원된 ninhydrin과 암모니아, ninhydrin이 반응하여 Ruhemann's purple이라는 청자색의 색소가 생성된다. 그 외에도 여러 가지 색소가 생성되나 이것이 주된 생성물이다. 아미노산에서의 발색은 보통 자색이지만 histidine, glycine에서는 적회색, phenylalanine, tyrosine, aspartate는 청색, proline은 황색으로 발색된다. 2㎍∼0.2㎍의 아미노산을 검출할 수 있다. 이 반응은 peptide와 단백질에서도 일어난다.

② Biuret 반응
알칼리성 수용액 중에서 2가의 구리이온과 biuret(NH2-CO-NH-CONH2, 요소가 carbamyl화된 화합물)는 착화합물을 만들어 적자색을 나타낸다. 단백질의 알칼리성 수용액에 황산구리를 가하면 단백질분자 중에 많이 존재하는 아미드기와 구리이온이 biuret-구리이온 착체와 같은 착화합물을 만들어 자홍색∼청자색의 용액으로 된다. 단백질 이외의 물질에서 이 발색반응이 일어나는 경우는 드물기 때문에 이 발색반응을 이용하면 시료 중의 단백질량의 정량을 할 수 있다. 발색한 용액의 흡광도를 파장 540∼560nm에서 측정하고 표준물질과 비교하면 시료 중의 단백질을 정량할 수 있다. 단백질이나 펩티드의 발색반응의 하이지만 민감도가 낮다.

참고 자료

없음