[생명공학] Ligation of DNA

목차

1.제목
2.목적
3.원리
- Ligation of DNA
4.방법
A. Cohesive end ligation
B. Blunt end ligation
C. 서로 다른 경우. (서로 다른 Enzyme을 이용한 경우)

본문내용

1) 실험 제목 : Ligation of DNA

2) 실험 목적 : 두 인접한 nucleotide의 3‘ hydroxyl과 5’ phosphate간에 phosphodiester 결합을 촉진키는 기능을 하는 ligase를 이용하여 DNA상의 nick을 공유 결합적으로 연결한다.

3) 실험 원리

- DNA의 ligation 이란?
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다. RNA ligase는 single strand의 DNA 또는 RNA 끼리 연결해 주는 효소로 5'-RACE와 같은 특수한 목적의 실험에서 사용될 수 있으나 굳이 설명하지 않겠다.
유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+
를 필요로 한다. 이들 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase 는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.

참고 자료

문헌 자료 - 생명분자 공학 실험 Manual & 생명과학 「광림사」Postlethwait, Hopson
Daum 통합검색 -
http://mbgl.donga.ac.kr/%EC%9C%A0%EC%A0%84%EA%B3%B5%ED%95%99_5.htm
네이버 지식검색 -
http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?dir_id=110205&docid=449800