플라스미드 dna 분리

목차

1.일자
2.목표
3.실험기구및 시약
4.과정
5.결과및 토의

본문내용

1. 실험일자:2003.3.25.
2. 실험 목적:plasmid DNA를 정제하는 방법을 익히고 정제해 본다.
3. 실험기구 및 시약
solution1,2,3. 100%ethanol, 70%ethanol.
원심분리기. voltexter, 피펫, ice box
4. 실험의 원리
기본적인 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 그러나 chromosomal DNA는 크기가 상당히 커서 가장 큰 플라스미드의 길이는 E. coli 의 염색체 길이에 8%밖에 되지 않는다. 이러한 물리적 차이에 의하여 분리를 할 수 있다. 또한 플라스미드와 bacteria DNA의 구조의 차이에 의해 분리된다. 플라스미드와 염색체는 구형인데 염색체는 extract 시 구형에서 선형조각으로 깨어지며 플라스미드에는 구형으로써 변화가 없다. 이 구조적인 차이점을 이용하여 정제된 플라스미드를 얻을 수 있다.
5. 실험과정 및 설명
①키운 균주를 1.5ml 따서 원심분리 시키고 상층액만 취한다.
➜원래는 진공상태를 이용(aspirate off)해서 상층액을 뽑지만 오늘은 피펫을 이용하였다.
②solution1을 vortexing.
➜세포벽을 깨는 과정이다.EDTA는 세포벽의 integrity를

참고 자료

없음