[생화학] LDH

목차

1. activity assay 결과
2. purification table
3. Km, Vmax 구하기
4. Western Blot
5. Coomassie blue
6. activity staining

본문내용

이번 실험에서는 homogenate로부터 salting out, dialysis, chromatography 등의 과정을 거쳐 LDH(lactate dehydrogenase)를 정제하여 효소의 활성을 측정하고, Km, Vmax 등의 값을 구해보았다. 또, Western blot, Coomassie blue staining, activity staining을 통해서 단백질이 정제되는 정도나 pattern을 확인할 수 있었다.
조직에 따라서 LDH의 종류나, kinetics등이 다른데, 우리 종의 경우 liver를 가지고 실험하였다.

western blot은 원하는 단백질의 존재여부를 확인하는 방법이다. LDH는 4개의 subunit으로 이루어져 있으며 각 subunit은 35kd으로 size marker와 비교하여 31kd부근에 band가 생겼음을 확인할 수 있다. 또, homogenate, dialysate, pool로 갈수록 LDH의 농도가 증가하므로 band도 더 진해질 것이다. (참고로 왼쪽 사진은 5방의 자료임) 우리 조의 결과가 잘 안 나온 이유는 transfer 과정에서 단백질이 제대로 transfer가 안되었을 수도 있고, washing 하는 과정에서 단백질이 모두 씻겨나갔을 수도 있다.

참고 자료

없음