[생명공학실험2] 제한효소를 이용한 DNA 절단

목차

1. 실험목적

2. 실험원리
1) 제한효소
(1) Type I restriction enzyme
(2) Type II restriction enzyme
(3) Type III restriction enzyme
2) 제한효소의 반응
3) 제한효소를 이용한 DNA의 절단 및 붙이기
4) DNA절단 제한효소와 절단인식자리

3. 실험방법

4. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적
생명공학의 기초가 되는 분자생물학의 기본실험인 미생물에서의 plasmid DNA를 절단하는 실험이 다. 이번 실험은 가장 기초가 되는 실험으로서 이 후에 하게될 전기영동 실험에서 응용하게 된다. 전기영동 실험에서는 거대분자들을 연구하기 위하여 사용하는 방법으로 PCR도 사용하게 된다. 이 실험을 통하여 DNA의 분리 및 확인을 알아보려고 한다.

2. 실험원리
1) 제한효소
DNA의 특정부위를 자르고 붙일 수 있다. DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바 깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)이 며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정 부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외 부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기 (adenine, cytosine)를 메칠화시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있 다. 유전자 재조합 기술에서는 DNA를 겨냥한 장소에서 절단하기 위해 제한 효소를 이용하고 있다. 이를테면 Eco RI과 Bam HI이라는 제한 효소가 절단하는 위치는 각각 다음과 같다.

참고 자료

-분자생물학, 한국분자생물학회, 아카데미서적, 1997
-최신미생물학실험, 홍순우외 12명, 아카데미서적, 1987
-Recombinant DNA ( Watson외 3명, Freeman Publishing)
-생물화학공학, 장호남 저, 방한출판사, 1997
-생화학, 레닌저150쪽, 1999