[식물] 형질전환 식물의 배양

목차

Ⅰ. Introduction
Agrobacterium에 의한 형질전환 방법
1. 순무의 형질전환

종자의 발아능과 종자세
§1. 종자의 발아능
§2. 종자세
Ⅱ. References

본문내용

Agrobacterium에 의한 형질전환 방법
1. 순무의 형질전환
(1) 식물체 절편
식물재료는 MS 0.1배 강도의 배지에서 무균상태로 6~7일간 키운 어린 묘이 하배축을 2~4mm로 잘라 절편으로 이용한다.

(2) 기본배양의 배지조성
① 1차 배양 (캘러tm 유도) : B5 염류 + B5 비타민 + 2,4-D 1mg/l + 수크로오스 3% + phytagar 0.6%, pH 5.6에 3~16일간 배양한다.
② 2차 배양 (재생배양) : B5 염류 + B5 비타민 + BAP 3mg/l + 제아틴 1mg/l + 질산은 5~10mg/l + 수크로오스 1% + phytagar 0.6%, pH 5.8에 2~8주 배양한다.
③ 3차 배양 (발근배양) : B5 염류 + B5 비타민 + IBA 2mg/l + 수크로오스 1% + phytagar 0.6%, pH 5.8에 2~4주 동안 배양하고, 이후는 토양에 이식한다.
(3) 아그로박테리움
A. tumefaciens 계통에 NPT Ⅱ 유전자와 GUS 유전자가 존재하는 이원 플라스미드 PCGN 7001을 3친 교배를 통해서 삽입시킨다.

(4) 급여배양
변형된 MS 배지 (MS염류 + myo-inositol 100mg/l + tiamine HCl 1.3mg/l + KH2PO4 200mg/l + 2,4-D 1mg/l + 수크로오스 3% + phytagar 0.6%, Ph 5.8) 위에 담배 세포를 살포하고, 그 위에 다시 여과지를 놓은 다음, 그 위에 준비된 절편을 놓는다. 여기서 절편을 18~24시간 동안 산광하에서 배양한다.

참고 자료

식물의 조직과 세포배양 / 대한교과서 / 최상진 / 1996 / p 45 - 81, 467 - 487
유전 / 한국유전학회 / 1997 / p 46 - 61