세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 04. MTT assay (WST-8 assay)

소개글

세포생물학실험 만점(A+) 실험 보고서(레포트) 04. MTT assay (WST-8 assay) 관련 보고서 입니다.

목차

１.   서론
 
２.   실험 목적
 
３.   실험 방법
가.    실험 재료(도구)
1)      샘플
2)      시약
3)      장비
나.    실험 방법
 
４.   실험 결과
 
５.   논의 (고찰)
 
６.   참고문헌

본문내용

１. 서론
Tetrazolium은 dehydrogenase 등의 효소에 의해 쉽게 환원되어 유색의 formazan을 형성한다. 이러한 원리로 가장 널리 사용되는 MTT tetrazolium은 노란색 수용성 기질로, 미토콘드리아에 있는 reductase에 의해 환원되어 청자색을 띄는 비수용성의 MTT formazan 이라고 불리는 crystal을 형성한다. 따라서 세포사멸에 의해 미토콘드리아가 제 기능을 하지 못하게 되면 MTT를 처리해도 formazan을 형성하지 못하게 된다. 이러한 특징을 활용하여 세포 성장 및 독성을 측정하는 MTT assay이 존재한다. MTT assay는 약리학, 독성학 등의 다양한 실험실에서 특정 물질이, 특정한 생물학적, 생화학적 기능을 50% 억제하는데 필요한 양을 나타내는 IC50을 측정하기 위한 용도로 널리 사용되고 있다.

２. 실험 목적
MTT tetrazolium을 이용하여 세포 사멸에 따른 미토콘드리아의 활성도 차이를 관찰한다.

３. 실험 방법
가. 실험 재료(도구)
( * 표시는 이전에 작성한 실험 보고서를 참고한다.)
① 샘플
- 마우스 종양 세포 4T1(Triple Negative Breast Cancer(TNBC))*
② 시약
- cell culture media (10% FBS, 1% P/S) *
- CCK-8(#K1013,APExBIO)
CCK-8는 ‘Cell Counting Kit 8’의 약자로, CCK-8 속 함유되어 있는WST-8을 이용하여 세포 생존율, 세포 독성 등을 측정하는 물질이다. WST-8는 테트라졸리움(Tetrazolium) 계열의 구성물질로, 살아있는 세포에서 미토콘드리아 탈수소효소(dehydrogenase)에 의해 환원되어서 오렌지 계열의 포르마잔(formazan)을 형성한다. 이때, 생성된 포르마잔은 수용성이고, 쉽게 용해되는 특성을 지니고 있다.
즉, 미토콘드리아의 활성 측정을 통해서, 실험에 사용한 화합물이 세포에 얼마나 독성을 나타내는지 확인하는 것이다.

참고 자료

최보희. "Tetrazolium의 환원과 formazan의 발색에 미치는 porphyrin류 및 polyphenol류 화합물의 영향규명." 국내석사학위논문 서울여자대학교 일반대학원, 2015. 서울
김승업, “세포배양 = Cell culture : 하나부터 열까지 알아보기”, 국내서 단행본, 자유아카데미, 2008 (p.180~ 183)
장선일 김강주, ”세포학 및 면역학 실험노트= Practical of cell biology and immunology”, 국내서 단행본, 익산: 원광대학교 출판국, 1996 (p.311~320)
남궁수민. "효소면역분석법을 이용한 도파민과 세로토닌의 검출." 국내석사학위논문 고려대학교 대학원, 2018. 서울