[임상병리학] PCR 에 관한 모든것

목차

1. PCR 이란? 원리!, 주의사항! ,PCR의 여러 종류
2. PCR을 이용한 DNA,RNA 정량
3. SSCP 법 , PCR-RELP 법
4. (PCR)은 일상생활에서 어떻게 쓰이는가?

본문내용

♦ PCR (PolymeraseChainReaction) 이란 ?
PCR은 DNA 양쪽 가닥을 주형으로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로 Genomic DNA로부터 원하는 DNA부분을 선택적으로 증폭시켜 Agarose gel을 사용하는 전기영동을 이용하여 bend를 확인하게 된다.

여기에는 [1] DNA denaturation [2]annealing (primer) [3] Extension (DNA합성) 과 같은 세 단계를 One cycle 로 해서 증폭한다.

[1] DNA denaturation : 일반적으로 두 가닥 DNA를 94도에서 15초~30초간 처리하여 각각 한 가닥 DNA로 해리시킨다. 너무 온도를 높이거나 처리시간을 지나치게 늘리면 내열성 DNA polymerase라 해도 실활하므로 주의가 필요하다.

[2]annealing (primer) : 열처리로 한가닥으로 변성한 DNA와 primer를 공존시킨후 온도를 낯추면 2종류의 primer는 각각 상보적인 한가닥 주형 DNA에 annealing한다. annealing에 가장 적합한 온도 와 시간은 primer의 염기배열과 그 길이에 따라 결정되지만 일반적으로 55도에서 30초~1분간 annealing한다. annealing온도를 높이면 primer - 주형 DNA의 mismatch가 감소되어 반응 특이성이 높아진다. 그러나 혼합 primer 또는 mismatch를 갖는 primer를 사용할 경우는 37~45도로 annealing온도를 낮출 필요가 있다.

참고 자료

없음