[A+] PCR, DNA 전기영동 실험 레포트

소개글

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목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. 실험재료
4. 실험방법
5. 실험 결과
6. 실험에 대한 고찰
7. 참고문헌

본문내용

1. 실험 목적
PCR로 DNA 다량 복제하고 PCR결과 물질을 분리 분석하는 DNA 전기 영동을 이해한다.

2. 실험 원리
DNA 복제는 복제기점이라는 뉴클레오타이드 서열을 가진 짧은 DNA 서열에서 시작된다. 복제기점에 DNA 복제개시에 관여하는 단백질이 결합하면 DNA 이중나선이 분리된다. DNA 중합효소는 딸가닥의 한쪽 말단에 뉴클레오타이드를 붙여주는데 이 효소는 가닥의 3’ 말단에만 새로운 뉴클레오타이드를 붙일 수 있다.
DNA 복제 과정을 따라하고 싶었지만 문제점이 많았다. 효소 추출의 어려움, 효소 활성 유지의 어려움 그리고 반복적인 반응을 유지하는 것이 불가능했다. 헬리카제를 대체하기 위해 수소결합으로 이루어진 DNA 이중가닥을 열로 분리했고 짧은 가닥의 DNA 를 합성할 수 있는 프리마제를 대체 할 수 있었다. 원래 PCR에 사용되었던 중합효소는 E coli의 DNA 중합효소 1인 Klenow fragment이었는데 이 효소는 DNA를 단일 가닥으로 풀기 위해 온도를 높이게 되면 파괴가 되어버려 매 cycle마다 효소를 다시 넣어주어야 했다. 그래서 열을 견디는 DNA 중합효소가 필요했다.

참고 자료

Cambell외, Campbell biology in focus 2판, 바이오사이언스, 14장 유전자 발현: 유전자에서 단백질로 (2017)
다인바이오, 다인바이오주식회사, PCR 기본원리, 2016년 09월 13일 작성.