[DNA] Ligation of DNA

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이번 실험에서는 각자가 biotechnology 회사의 직원으로서 유전공학적 방법을 사용하여 고부가가치의 물질을 대량으로 생산하고자 가정한다. 대상이 되는 물질은 해파리의 green fluorescent protein(GFP). 그 이유는 가로등을 GFP flask로 바꾸면 에너지 전환으로 천연자원을 절약할 수 있기 때문이다. 따라서 GFP유전자를 박테리아로 도입하여 그 유전자가 mRNA로 전사되고 단백질로 번역되도록 하는 것이 목표이다.
본 실험에서 사용하는 plasmid vector는 pBR322로서 항생제 ampicillin과 tetracyclin에 대한 저항성 유전자(ampR, tetR)를 보유하고 있다. pBR322의 tetR 유전자 내부에는 BamHI site가 존재하는데 이 부위를 제한효소 BamH으로 절단하여 여기서 GFP유전자를 포함한 DNA fragment(양쪽에 BglII로 절단된 말단부위를 가지고 있음)를 삽입한다. Insert DNA를 포함하지 않는 intact plasmid는 ampicillin과 tetracyclin이 포함된 배지에서 자랄 것이다. 삽입된 recombinant는 ampicillin 배지에서는 자라나 tetracyclin 배지에서는 자라지 못할 것이다. 또한 GFP유전자를 클로닝하였기 때문에 UV를 조사하면 재조합 형질전환체는 녹색형광을 띄게 됨으로써 간단히 형질전환체를 선발할 수 있다.

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