소개글
Restriction enzyme reaction, DNA Clean up, Ligation으로 Recombinant DNA를 만들고, Recombinant DNA (Plasmid)를 이용해 TOP10 cell에 Transformation하고, Kanamycin을 처리한 배지에 배양하여 Transformation이 제대로 이루어졌는지 확인하는 실험을 진행했습니다.
제한 효소 처리에 필요한 조건, Ligation 과정에서의 비율을 설정하는 방법, Ligase 역할, 등을 탐구해보았고, Cloning 후 selection 과정에 대해 Project에 기재하였습니다.
A+ 평가 받았습니다.
목차
1. Title
2. Purpose
3. Material
4. Method
5. Results
6. Discussion
7. Projects
8. Reference
본문내용
본 실험에서는 my product(clean up PCR product)와 pET28b를 이용하여 Enzyme cut, DNA clean up, Ligation 과정을 거쳐 Recombinant Plasmid (Ligation product)를 만들었다. 이어서 Ligation product를 TOP10 cell에 Transformation하여 Kanamycin처리한 배지에 배양하여 single colony를 관찰할 수 있었다.
먼저, 실험 과정에서 사용된 Materials에 주목하여 실험 원리를 이해해 볼 수 있었다. 첫 번째로, pET28b Vector에 관하여 탐구해볼 수 있었다. 본 실험에서의 enzyme site가 NdeⅠ, XhoⅠ인 점을 고려하여, pET28b Vector를 이용하여 만든 recombinant plasmid 중 NdeⅠ, XhoⅠ를 enzyme site로 갖는 pET28b- hTIG3(1-132)를 예로 들어 비교해 보았다. pET28b- hTIG3(1-132)의 형태와 특징을 아래의 표로 정리해볼 수 있었고, 이를 통해 pET28b의 특징도 이해할 수 있었다.
<표 1>에서의 pET28b-hTIG3(1-132)처럼 enzyme site는 NdeⅠ, XhoⅠ으로 동일한 것을 확인할 수 있었다. 이에 restriction enzyme NdeⅠ, XhoⅠ에 의해 절단된 말단부위의 특징과 restriction enzyme을 사용할 때의 반응조건에 관하여 탐구해보고, 본 실험 과정에 적용해 볼 수 있었다.위의 restriction enzyme의 인식부위를 고려하였을 때, Enzyme cut과정에서 사용한 Restriction enzyme NdeⅠ과 XhoⅠ는 sticky end를 형성한다고 판단할 수 있었다. sticky end는 제한 효소에 의하여 2~4개의 nucleotide를 엇물리게 절단하여 말단 부위에 형성되는 짧은 돌출 부위를 의미하고, Blunt end는 염기의 배열의 중간지점에 엇물리지 않게 이중가닥을 절단하여 생긴 말단 부위를 의미한다 . 이처럼 Enzyme cut에 사용되는 restriction enzyme은 특정 부위의 염기서열을 절단하면서 sticky end와 blunt end를 형성한다.
참고 자료
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-132)
https://biorp.kribb.re.kr/view/resource/BP1429271
Enzynomics, Restriction enzyme, 제한효소 인식부위, (NdeⅠ, XhoⅠ)
https://www.enzynomics.com/shop/product_item.php?it_id=101006 (NdeⅠ)
https://www.enzynomics.com/shop/product_item.php?it_id=101007 (XhoⅠ)
T.A. Brown 저, 이병무 외 3인 역, 『유전자 클로닝과 DNA 분석 제 7판』, 월드사이언스, 2017, p. 30~31, 55
김은중 외 7인 저, 『임상 분자생물학』, 고려의학, 2010, p. 81-83
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https://www.enzynomics.com/shop/product_item.php?it_id=801003
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https://terms.naver.com/entry.naver?docId=5569155&cid=61233&categoryId=61233
남상욱, 권혁빈, 『유전공학의 이해』, 라이프사이언스, 2008, pp. 92~94, 97
MS 워드 
