[생물학 실험] Gel filtration chromatography, SDS-PAGE를 이용한 단백질의 분리 정제

목차

Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
References

본문내용

1. Introduction

1.1 Affinity Chromatography (Ni-NTA)
Affinity chromatography는 정제하려고 하는 단백질에 특정한 표지(tag)을 한 후, 그 표지와 특이적으로 상호 작용하는 물질을 resin에 붙여서 그 물질을 정제하는 방법이다. 흔히 많이 사용하는 tag으로는 Myc, His, GST 등을 들 수 있다
여기에서 사용하려는 resin은 Ni-NTA이다. 이것은 His-를 tagging한 단백질에 사용하는 것이다. 일반적으로 His tag은 6개를 붙이며, 이 tag은 크기가 작고, 전하를 나타내지 않기 때문에 일반적으로 구조나 단백질의 성질에 영향을 거의 주지 않는다.
Imidazole의 구조가 histidine의 구조와 비슷하기 때문에 buffer내에 imidazole의 양이 많아지게 되면 histidine과 Ni2+과의 interaction이 약해져서 tagged protein이 elution된다.

참고 자료

http://www.google.co.kr/search?q=cache:1S1IsJvZXgsC:www.piercenet.com/files/0671sm4.pdf+affinity+chromatography+GST&hl=ko&ie=UTF
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http://www.mmb.usyd.edu.au/MBLG2001/BMedSci/Lecture15.html
http://gcg.tran.wau.nl/local/Biochem/educatio/Colleges/BSM/lectures/lecture_4/bioaffinity%20chromatography.doc
http://www.csupomona.edu/~nebuckley/Courses/Bio451/Lectures/Bio451Lecture4.htm
http://www.sfu.ca/bisc/bisc-429/electrophoresis.html
http://bh.knu.ac.kr/%7Ejkylim/Documents/2DReagents%26GelPreparation.doc