플라스미드 형질전환 실험

소개글

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목차

(1) Competent cell 준비
(2) 형질전환 (Transformation)
(3) 기타 알아두어야 할 것들

본문내용

1) 고형배지에 streaking한 E.coli Novablue colony 하나를 LB (tet+) 3 ㎖에 접종하여 밤새 배양
2) 50 ㎖ LB 배양액에 전날 배양한 Novablue 0.5 ㎖을 접종하고 37℃ 진탕배양기 (shaking incubator)에서 OD600 0.4가 될 때까지 배양
☞ 효율적인 형질전환을 위해서는 살아있는 박테리아의 수가 108 cells/ml을 넘지 않도록 해야 함
3) 배양액을 50 ㎖ 원심분리 튜브에 옮기고 얼음 위에 10분간 방치하여 식힘.
4) 3,000 rpm, 4℃에서 10분간 원심분리 → 상층액 제거
5) pellet을 얼음에서 식힌 50 mM CaCl2 용액 10 ㎖에 부유시킴.

참고 자료

없음