생화학실습 보고서(plasmid DNA의 분리)

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최초 등록일: 2022.11.07
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실험목적
Plasmid DNA 분리법을 사용하여 박테리아 DNA를 분리하는 과정을 이해한다.

이론
Plasmid DNA 분리법에는 여러 방법이 있으나 공통적인 3 단계가 있다.
첫 번째로 Plasmid로 형질전환 된 박테리아를 대량 배양한다.
두 번째는 박테리아를 용해시켜 impure한 DNA로 회수한다. 이때 박테리아 culture 용액을 원심 분리하여 박테리아만 침전시킨 후 펠렛을 lysozyme 과 SDS 표백제가 포함된 알킬리 용해 버퍼에 resuspend(세포가 붙지 않는 자유상태)로 되게 한다. 큰 사이즈의 플라스미드 DNA(15kb 이상)의 경우 DNA가 쉽게 조각날 수 있기 때문에 lysis 조건을 잘 갖춰야한다. 알칼리 조건에서 박테리아DNA는 변성되며 용액에서 침전되나 plasmid DNA는 supercoil(꼬인 고무줄처럼 이중 나선 DNA가스스로를 감싸 형성한 둥근 코일 모양) 이기 때문에 변성이 크게 일어나진 않는다.

참고 자료

[네이버 백과사전]
[위키피디아]
[화학대사전]
[두산백과]

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