[일반생물학실험]Plasmid 분리 실험 & Agarose gel을 이용한 plasmid 전기영동

소개글

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목차

1. 실험 목적
2. 실험 배경
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
1.1. E.coli를 배양해 플라스미드를 분리하고, 분리한 플라스미드를 직접 만든 Agarose gel을 이용하여 전기 영동한다.

2. 실험 배경
2.1. Plasmid DNA 분리의 원리
주로 mini-prep이라고 부르는 이 방법은 plasmid DNA를 소량 분리하는 방법이다. 가장 보편적으로 사용되는 방법인 Alkali lysis method이다. 기본적인 원리는 그림에서 보듯이 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA 만을 분리하는 것이다. 이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것이다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 슷하기 때문에 구분하여 분리하기가 쉽지 않다. 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리할 수 있다. Alkalilysis method 의 핵심 원리는 다음과 같다.
1.1.1. 세포벽을 깬다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.

참고 자료

Brock의 미생물학 제 11판, 월드사이언스