[유전공학실험] A+레포트 / Sequence analysis 실험레포트

소개글

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목차

1. 실험 목적

2. 실험 이론
1) 사슬 종결법
2) 화학적 분해법
3) 자동 염기서열 분석법
4) 차세대 염기서열 결정법
5) 3세대 염기서열 분석법

3. 준비물

4. 프로그램 사용 방법
1) SnapGene Viewer와 ApE 프로그램 사용

5. 실험 결과
1) recombinant-cloned 서열 (6579bp)
2) scro_HD 유전자 부위

6. 논의 및 고찰
1) 유전자 분석의 다른 방법에는 어떠한 것들이 있는가?

본문내용

1) 실험 목적
재조합된 플라스미드 DNA의 sequence를 보고 insert 부위와 promoter 부위 등을 확인한다.
2) 실험 이론
● DNA 염기서열 결정법
염기서열을 결정하는 것은 유전자 분석에서 가장 중요한 단계이다. 각 유전자의 위치를 확인하고 염기서열을 결정함으로써 유전자의 최종정보를 얻을 수 있다. 염기서열을 통해 새로운 유전자와 그 산물의 구조와
기능에 대한 예측을 가능하게 하고, 생명체 간의 유연관계와 진화 단계를 이해하는 데 기초가 된다. 1. 사슬 종결법
사슬 종결법(chain termination method)은 프레데릭 생어(Frederick Sanger)가 발명한 방법으로, 디디옥시 사슬종결 방법(dideoxy chain termination method) 혹은 생어 염기서열 결정법으로도 불린다. 이
방법은 DNA 중합효소를 주형 DNA에 처리하여 신장되는 사슬을 특정 위치에서 종결시켜 여러 조각들을
만들고, 전기영동으로 이것의 크기와 순서를 분석하여 염기서열을 알아내는 방법이다.
사진5-1. dNTP와 ddNTP의 구조
사슬 종결법은 DNA 사슬이 신장될 때 특정 위치에서 사슬이 끊어지도록 하기 위해 3‘-OH가 H로 환원되어 DNA의 중합을 방해하는 디디옥시뉴클레오티드(dideoxynucleotide, ddNTP)를 이용한다. 3‘-OH가 없기 때문에 인산디에스테르결합이 생기지 못하고 끊어지게 된다. 하지만 ddNTP만 사용하면 각 염기의 첫
번째 위치에서 종결되기 때문에 염기서열을 분석할 수 없다. 따라서 부분적 종결을 유도하기 위해 3’-OH
를 가지는 디옥시뉴클레오티드 삼인산(dNTP)을 함께 이용한다. 사슬 종결법은 세 가지 장점이 있다. 첫 번째는 표적 DNA가 반드시 단일가닥일 필요는 없다는 점이다. 이중가닥을 이용할 때에는 변성과정을 거쳐 단일가닥으로 만들어준 후 프라이머를 부착하면 된다. 두 번째
장점은 사슬 종결법으로 DNA를 대략 200bp까지 정확하게 읽어낼 수 있다는 점이다. 세 번째 장점은 프라이머를 따로 표지할 필요가 없고 DNA 중합과정 초기에 방사 표지된 35S-dCTP를 사용하여 표지할 수
있다. 동위원소 35S는 32P에 비해 반감기가 길고 방사선의 세기가 적당해서 젤 사진에서 띠가 선명하게 나타나기 때문에 주로 사용된다.

참고 자료

없음