plasmid DNA miniprep

목차

Ⅰ. Object

Ⅱ. Introduction
1. Plasmid Purification
2. Alkaline lysis에 사용되는 시약의 역할

Ⅲ. Materials

Ⅳ. Method

Ⅴ. Result

Ⅵ. Discussion

Ⅶ. Reference

본문내용

Ⅰ. Object
Transformed cell(DH5α+pET28a)에서 plasmid DNA를 분리할 수 있다.

Ⅱ. Introduction
1) Plasmid Purification
플라스미드 DNA 분리는 한 번에 약 20~30㎍ 정도의 플라스미드를 분리하는 방법인 플라스미드 소량 분리법(plasmid mini preparation)이 주로 사용된다. cell로부터 plasmid를 분리하기 위해서는 단백질이나 RNA를 제거해야할 뿐 아니라 유전체 DNA 또한 제거되어야 한다. 대부분의 플라스미드 DNA 분리 방법은 기본적으로 세 과정으로 나눌 수 있다. 우선, 세포로부터 플라스미드 DNA뿐만 아니라 유전체 DNA도 포함하는 세포 용해액(cell lysate)을 얻는 과정이다. 다음 단계는 플라스미드 DNA와 유전체 DNA의 구조적 차이(플라스미드
DNA는 원형이며 유전체 DNA보다 매우 작음)를 이용해 플라스미드 DNA만 분리하는 과정이다. 마지막으로는 분리된 플라스미드 DNA를 농축시켜 순수한 플라스미드 DNA 용액으로 만드는 과정이다.

(1) Alkaine Lysis Mini prep
가장 일반적으로 쓰이는 분리법으로 크게 4단계로 나눌 수 있다. 첫 번째는 세포를 파괴하는 용해 단계, 두 번째는 단백질을 제거하고 유전체 DNA를 변성시키는 단계, 세 번째는 중화 단계, 마지막은 DNA 회수 단계이다. 먼저 첫 번째 단계에서 현탁액(용액 Ι)은 침전된 박테리아를 현탁시키고, 용액 Ⅱ는 세포의 용해와 단백질 제거 및 DNA를 변서시킨다. 용액 Ⅱ에 있는 SDS는 세포막에 포함된 인지질과 단백질을 제거하여 세포막을 터뜨려 세포 성분의 방출을 유도한다.

참고 자료

남상욱, 권혁빈, 최선심, 유전공학의 이해 제3판, 라이프사이언스, 2016.09.01.
BRIC, https://www.ibric.org/myboard/read.php?id=519797&Board=exp_qna, 70% EtOH, 2020.12.04