단백질(Protein) 추출 및 정량 실험 레포트

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목차

1. Title

2. Date

3. Purpose

4. Materials

5. Methods
1) 단백질 추출
2) 단백질 정량

6. Results

7. Discussion

8. Projects
1) Bicinchoninic acid 의 조성 및 역할을 조사하고 이를 기반으로 BCA assay의 원리를 상세히 설명하시오.

9. References

본문내용

4. Purpose : Rat 조직으로부터 단백질을 분리하고 BCA assay를 이용하여 정량적으로 측정한다.

5. Materials : Rat 조직(대장), RIPA buffer, pipette, tip, 1.5ml tube, homogenizer, ice, 96well plate, 1mg/ml BSA, DW, BCA solution

<중 략>

8. Discussion
이번 실험은 rat 대장조직으로부터 단백질을 추출해 BCA assay를 이용하여 정량적 측정을 진행하였다. 단백질 추출 시 쓰인 RIPA buffer는 세포를 깨는 역할을 하며, RNA추출과 마찬가지로 물리적인 힘으로 세포를 깨준다. 단백질은 일반적으로 세포질에 퍼져있기 때문에 원심분리했을 때 상층액만을 추출한다. 단백질의 양을 측정할 수 있는 다른 실험방법은 lowery method, Bradford method가 있다. BCA assay는 lowery method에서 발전된 형태이다. BCA assay는 이들에 비해 아미노산 조성에 따른 발색 정도의 차이가 없고 민감하지만 반응이 느리고 단백질이 변성되는 단점이 있다.

<중 략>

9. Projects
① Bicinchoninic acid 의 조성 및 역할을 조사하고 이를 기반으로 BCA assay의 원리를 상세히 설명하시오.

BCA assay에서 쓰이는 Bicinchoninic acid (BCA)는 reagent A와 B가 50:1로 혼합된 것이다. 이들의 혼합물의 pH는 11.5인 염기성을 유지한다.

참고 자료

Van Holde 외 4명, Principles Of Physical Biochemistry, Prentice Hall, 2005, 494~503page
Ninfa, Alexander J. , Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology, 2010, 117~118page
Smith, P.K., et al, Measurement of Protein Using Bicinchoninic Acid, 1985, biochem 76~86page