Restriction enzyme treatment
- 최초 등록일
- 2021.09.06
- 최종 저작일
- 2017.05
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목차
1. 실험목적
2. 실험원리
1) Type I restriction enzyme
2) Type II restriction enzyme
3) Type III restriction enzyme
4) 절단방법
5) 절단모양
6) Restriction Mapping
3. 실험기구 및 시약
4. 실험방법
본문내용
실험목적
PCR하여 얻은 DNA를 제한효소 처리하여 특정한 염기서열을 인식하고 절단한다.
실험원리
제한 효소란 DNA 분자의 특정 염기 서열을 인지하여 이중 가닥 DNA를 절단하는 균주 특이성을 갖는 핵산 내부 가수 분해 효소(Endonuclease)이다. 이것의 원래 기능은 세포 내로 침입해 오는 바이러스나 외래 DNA를 절단, 제거하는 박테리아의 자기방어 기구이며 자신의 DNA는 메틸화시켜 외부의 DNA와 구분하여 보호한다.
제한효소는 크게 3가지 type으로 분류 (Type Ⅰ, Type Ⅱ, Type Ⅲ)하고 있는데 우리가 가장 많이 사용하고 있는 제한효소는 회문 구조를 가진 4~6개의 짧은 염기쌍을 인식하는 Type Ⅱ효소이다.
제한효소를 이용하여 DNA를 절단하는 것은 분자생물학에 있어 가장 기본적인 과정중의 하나이므로 각각의 반응 조건을 정확하게 맞추어 주는 것이 실험을 잘하는 지름길이다.
1. Type I restriction enzyme
DNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 다른 부위를 절단한다. 즉, 인식부위는 특이성을 가지지만 그로부터 약 1,000 base pair가 떨어진 부위를 절단하기 때문에 원하는 부위를 선택하여 자르기가 어렵다. 따라서 이 효소들은 박테리아의 기능에는 중요하지만 실험목적으로는 잘 사용되지 않는다.
참고 자료
없음