미생물실험 보고서 - 녹색형광단백질(GFP) 접종 및 배양

소개글

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목차

Ⅰ. 실험 목적

Ⅱ. 이론

Ⅲ. 실험 기구

Ⅳ. 실험 방법
ⅰ. 배양 실험의 준비 (배지 제조, 기구 멸균, 항생제 및 IPTG제조)
ⅱ. 세포배양

Ⅴ. 추론

Ⅵ. 실험 결과
ⅰ. IPTG의 단백질 발현 원리
ⅱ. Cell growth curve
ⅲ. 미생물 배양 실습 중 설명된 멸균 방법 3가지
ⅳ. 실습에서 얻은 O.D600 측정값을 이용하여 세포성장 곡선을 그리시오
ⅴ. 표를 보고 세포 성장 곡선을 그리고, IPTG 접종 위치를 표시하라

VI. 논의 및 고찰

본문내용

Ⅰ실험 목적

- cloning을 마친 녹색형광단백질(GFP)의 발현 벡터(expression vector)가 형질전환(transformation)이 되어있는 대장균, E.coliBL21(DE3)의 세포 증식 형태를 시간의 흐름에 따라 관찰한다.
- IPTG를 이용하여 세포 중심 중에 단백질 발현을 inducing 할 수 있고 원리를 이해한다.
- 세포 배양에 필요한 시약과 역할에 대해 이해한다.

Ⅱ 이론

• 유전자 클로닝(gene cloning) : 재조합 DNA 및 유전자 조작 기술
- 유전자 클로닝을 위한 재료 및 기술 : vector (DNA 분자), DNA 조작 기술
- 유전자 클로닝이 중요한 이유는 비교적 간단한 생물체인 대장균(E coli)의 경우 ~4000개의 유전자 부위가 존재하고 사람의 경우는 ~20배가 넘는데, 선별, 분리 기술을 통해 세포가 지닌 모든 다른 유전자들로부터 분리된 하나의 개별 유전자의 순수한 샘플을 제공할 수 있기 때문이다.

• PCR(polymerase chain reaction,중합효소 연쇄반응) : 필요로 하는 DNA 단편을 최대한 증폭시켜서 고농도의 DNA를 얻기 위한 반응
- PCR을 위한 재료 및 기술 : DNA(template), Primer, 중합 효소, dNTPs
- PCR이 중요한 이유는 클로닝과 동일하나 유전자 분리를 위한 제2의 접근법을 제공하고 신속하고 간단하며, 하나의 출발 분자로부터 수백만 개의 복사체를 쉽게 증폭시킬 수 있기 때문이다. 이는 높은 민감성은 단일 세포 또는, 말라버린 혈흔이나 오래된 인간의 뼈와 같은 물질로부터 유전자 분리에 사용될 수 있음을 의미한다.

• GFP(Green Fluorescent protein) : 녹색 형광 단백질
- 유전자 재조합 기술을 이용하여 만들어진 recombinant DNA molecule을 숙주 세포로 대장균(E coli)에 형질 전환(transformation)시켜..

<중 략>

참고 자료

없음