LDH assay

소개글

"LDH assay"에 대한 내용입니다.

목차

1. introduction
2. material&method
3. result
4. discussion

본문내용

introduction

LDH assay objective-젖산탈수소효소의 활성을 측정한다.
LDH 역할-세포질에 풍부하며 해당과정을 하는 세포에 필수적으로 들어있고 해당과정에서 lactate가 만들어지면 LDH가 젖산이 pyruvate로 산화될때 NAD+는 NADH로 환원하는 과정을 촉매하는 enzyme이다.
LDH assay principle- 젖산탈수소효소는 일반적으로 세포막을 통과하지 못하여 세포 밖으로 배출되지 않으나, 세포막이 손상되거나 세포가 죽는 경우 media로 방출된다.이때 방출된 LDH는 세포가 죽어간다는 신호로써 산화환원반응에서 NAD+가 NADH로 환원되는 반응을 통해 NADH(340nm)흡광도를 잴수도 있지만 자외선 영역이므로 눈으로 볼수 없기 때문에 가시광선범위로 유도하는 coupling assay를 하여 WST(연노랑)물질을 WST-formazan(450nm)으로 전자를 받은 상황의 진한 노랑을 눈으로 확인하여 볼수 있는 전형적인 biochemical assay이다.
cytotoxic treat
1.rotenone-미토콘드리아 complex1의 inhibitor
2.triton x 100-positive control로 사용되며 세포막을 투과시키게 해서 세포를 용해하고 단백질과 세포소기관을 추출할 때 사용한다.
plate 구성하는 control group
1.background control- media의 LDH를 측정한다. 보통 cell culture media에는 FBS가 들어있는데 이런 혈청들은 실험 결과에 많은 영향을 끼치며 FBS가 들어있지 않은 serum free media나 background control을 줘서 media에 함유된 LDH를 구해서 보정한다.
2.volumn control-assay media 100 ul에 lysis solution 10 ul을 첨가해서 high control 에서 늘어난 volumn을 보정한다.
3.low control-실험중 자연적으로 손상된 세포에서 방출되는 LDH를 측정

참고 자료

https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=161816&ksr=1&FindText=LDH%20FBS
http://webbook.me.go.kr/dli-file/nier/09/021/5609190.pdf
https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=391047&ksr=1&FindText=LDH%20FBS