[생명공학실험 예비레포트]Polymerase Chain Reaction

소개글

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목차

1. 실험 제목

2. 실험 목적

3. 실험 이론
1) PCR
2) PCR의 원리
3) DNA 중합효소(DNA polymerase)
4) 디옥시리보뉴클레오타이드(dNTP)

4. 기구 및 시약
1) 기구
2) 시약
3) 실험 전 준비

5. 실험 방법

6. 참고 사항
1) Primer 제작 시 고려사항
2) PCR 주의사항
3) Spin down 시키는 이유
4) HPRT (hypoxanthine phosphoribosyltransferase)
5) NCBI (National Center for Biotechnology Information
6) 증폭된 DNA를 –20℃에서 보관하는 이유
7) PCR PreMix

본문내용

3) 실험 목적
- 저번 실험에서 추출한 Genomic DNA를 사용하여 HPRT1 유전자를 PCR 기법으로 증폭 시킨다. (PCR Premix를 사용함)
- PCR의 원리를 이해하고 Thermal Cycler의 사용법을 익힌다.
- HPRT1 gene의 유전정보를 NCBI에서 확인한다.

4) 실험 이론
∎ PCR
- 1983 미국의 생화학자 캐리 멀리스(Kary Mullis)가 개발한 DNA 복제방식으로 Polymerase Chain Reaction(중합효소 연쇄반응)이라고도 한다. PCR은 DNA의 특정 부분을 반복적으로 복제하여 DNA를 증폭시키는 기술이다. DNA가 증폭되는 시간이 짧고 아주 적은 양으로 많은 양의 DNA를 얻을 수 있다. 재조합 DNA를 만들고자 할 때 표적 유전자만 골라내어 증폭하면 다량으로 얻을 수 있다. 혈연관계 확인, 범인 판별 등에 필요한 충분한 양의 DNA를 얻을 수 있다. 유전적 질병이나 바이러스 감염에 의한 질환의 진단에 이용된다.

∎ PCR의 원리
- 증폭시키려 하는 template DNA와 함께 증폭시키고자 하는 특정 부위에 결합하는 primer와 DNA 중합효소, 새로운 DNA를 만들기 위한 재료인 dNTP를 함께 넣어 준다. PCR은 3가지 단계로 이루어진다. 변성(Denaturation), 결합(Annealing), 신장 (Elongation)순으로 진행한다. 이 3단계를 n회 반복하면 개 만큼의 DNA가닥이 만들어진다. 한번 반복한 것을 1cycle이라고 한다. 우리가 얻고자 하는 정확한 표적 서열은 3번째 순환(3cycle)부터 얻을 수 있다.

① 변성(Denaturation)
- 두 가닥의 DNA를 분리시켜 한 가닥의 DNA상태가 된다.

참고 자료

없음