190313-Western blots- Lee YK

아기사슴단비

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최초 등록일: 2020.12.10
최종 저작일: 2016.05; 6페이지/ MS 엑셀; 가격 1,000원

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Western sample preparations
Lysis bufer preparations
Lysis buffer 1000 3000 6300
Aprotinin(1mg/ml) 7ul 28
Leupeptin(1mg/ml) 7ul 28
Phosphatase inhibitors 10ul 40
PMSF (fresh), 100mM in iso-prophylalchol ( 2 propanol) 10ul 40 0.0174g + 1ml

add total Lysis buffer 300ul to each sample 1 scoop of tissue
total 30min ice incubation ( vortex 10분 마다 한번씩)
centrifugation 13000 rpm 15min 4 도씨

BCA 정량
buffer 980ml + blue 시약 20 ul =total 1ml
BSA : 0,1,2,3,4,5 ul add
Sample 1ul add to each wells
sample 1개당 모두 동시에 100 ul add
STD curve와 OD값을 이용하여 protein 농도를 구하고 필요한 양만 큼 dillution하기
Sample dillution 15-20ug/ml
Sample 정량후 total 15 ul 에 20ug으로 만들어서 5ul의 4x dye (10% mercaptobutanol + nupage dye를 넣어 준다)

참고 자료

없음

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