[생화학] 세포의 RNA 추출

소개글

2020년 1학기 연세대학교 생화학 강의 레포트입니다.

목차

1. 실험 목적 및 원리
2. 시료, 시약 및 기구
3. 실험 방법
4. 실험 결과
5. 고찰
6. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적 및 원리

9주 차 실험으로 세포의 RNA를 추출하는 실험을 진행하였다. RNA는 유전자 정보를 매개하고, 유전자 발현의 조절 등에 관여하는 핵산이다. 생명체의 DNA에 유전자가 보관되어 있지만, DNA의 정보는 RNA의 형태가 되어야 단백질을 생산할 수 있다. RNA는 유전자 발현에 필수적인 역할을 하므로 매우 중요한 핵산이며, RNA에 관한 많은 실험이 이루어져 센트럴 도그마를 비롯한 유전자 발현 과정을 자세히 규명하게 되었다.

<중 략>

5. 고찰

이번 실험에서는 세포에서 RNA를 추출하였다. 실험 과정에서 원심분리 3번의 의미, 실험 결과 값인 흡광도와 농도의 관계, A260/A280 ratio의 의미, DNA 추출과의 비교 순으로 실험의 의미를 고찰하였다.
실험에서는 3번의 원심분리를 진행했는데, 첫 번째 원심분리를 한 뒤에는 상층액을 사용하고, 두 번째와 세 번째 원심분리를 한 뒤에는 가라앉은 펠릿을 사용한다. 이러한 차이는 어떤 시료를 넣고 원심분리를 진행했는가에 따른 차이이다. 원심 분리 세 번은 Chloroform을 넣은 뒤, Isopropanol을 넣은 뒤, 75% ethanol in DEPC water를 넣은 뒤의 과정에서 진행하였다. 첫 번째로 Chloroform을 첨가하면 추출물을 상층인 수성층과 하층인 유기층으로 분리한다. 따라서 RNA는 상층에 위치하므로 상층만을 따서 실험에 활용한다. 두 번째로 Isopropanol은 수성층에 존재하는 RNA를 침전시키는 역할을 하므로, 가라앉은 펠릿만을 실험에 사용하기 위해서 상층액 부분은 제거한다. 세 번째로 75% ethanol in DEPC water는 에탄올이 Isopropanol과 유사하게 RNA를 침전하는 역할을 하므로 이때도 가라앉은 펠릿만을 이용하기 위해 상층액을 제거한다. 펠릿을 따서 RNase를 억제하는 DEPC water에 넣으면 세포에서 RNA의 추출이 완료된다.

참고 자료

가렛 생화학 4판, 라이프 사이언스
생화학 이론 강의안. 9주 핵산
생화학 실험 강의안. 9주 세포 RNA 추출
배지[Medium] (간호학 대사전),
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=491668&ref=y&cid=60408&categoryId=55558
핵산 [Nucleic acids] (분자ㆍ세포생물학백과),
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5568800&cid=61233&categoryId=61233
RNA[Ribonucleic acid] (분자ㆍ세포생물학백과),
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=5569040&cid=61233&categoryId=61233