[미생물학실험-단백질분야]미생물학실험2-단백질

소개글

실험목적
- SDS-PAGE 방법에 대해 알아보고자한다. 본 실험에서는 고도 효소와 BSA를 전기영동하여 각 단백질의 분자량을 확인하고자 한다. 본 실험을 통하여 기본적인 단백질전기영동에 지식을 습득하고자

목차

1.SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate0polyacrylamide gel electrophoresis)
2. protein purification
3. 단백질의 농축과 투석

본문내용

실험목적
- SDS-PAGE 방법에 대해 알아보고자한다. 본 실험에서는 고도 효소와 BSA를 전기영동하여 각 단백질의 분자량을 확인하고자 한다. 본 실험을 통하여 기본적인 단백질전기영동에 지식을 습득하고자 한다.

실험원리
1) SDS-PAGE를 통해 확인할 수 있는 것들
- 단백질의 정제도 확인
- 단백질의 분자량을 결정
- 단백질의 농도 확인
- Proteolysis를 확인
- immunoprecipitated protein을 확인
- immunoblotting을 수행하기 위한 첫 단계
2) 일반적으로 전기영동에서 단백질에서 단백질의 이동은 단백질의 크기, 모양, net charge에 의해 결정된다. 단백질의 크기, 모양, net charge에 영향을받는 native PAGE는 단백질의 정확한 분자량을 알거나 단백질의 정제를 알기에는 적당하지 못하기 때문에 이런한 단점을 보완한 것이 SDS-PAGE이다.
SDS-PAGE는 샘플을 준비할 때 뜨거운 SDS를 처리하기 때문에 대부분의 단백질에 anion이 결합하여 단백질에게 동일한 nagative charge를 부여하게 된다. 또한 SDS는 단백질의 noncovalent 결합을 파괴하기 때문에 단백지르이 구조를 풀어지게 하여 동일한 모양을 가지게 한다. SDS와 함께 들어가는 2-merxaptoethanol이나 dithiothreitol은 단백질을 더욱 더 변성시킨다. 이러한 결과에 의해 SDS-PAGE는 단백질의 모양과 전하에 영향을 받지 않고 크기에 의해서 분리될 수 있다.

참고 자료

없음