[유전자클로닝]미생물학실험

소개글

플라스미드란 박테리아와 다른 유기체에서 발견되는 DNA이다. plasmid는 숙주세포 염색체와 무관하게 복제할수 있다. plasmid는 원형 DNA분자이면 박테리아 세포내에서 독립적으로 전재한다. plasmid는 항상하나, 혹은 그 이상의 유전자를 가지고 있으며, 이러한 유전자는 숙주 박테리아에서 나타나는 유용한 특성의 원인이다. 예를 들면 chloramphenicol이나 ampillin 같은 항생제의 독성농도에서 살수 있는 능력은 항생제에 저항하는 유전자를 가진plasmid가 박테리아에서 존재하기 때문이다. 실험실에서 항생제 저항성은 종종 선별표식자로 사용되면, 이것은 배양되는 박테리아가 특별한 plasmid를 포함하는지를 확인하게 한다.

목차

1. small-scale preparation of plasmid DNA
2. DNA 전기영동 및 제한효소에 의한 DNA 절단 (EcoRⅠ)
3. 대장균의 형질전환 (Hige-voltage electroportion 방법을 이용한 형질전환)
4. Polymerase Chain reaction(PCR)

본문내용

실험목적

어떤 물질을 숙주세포에 잡아 넣기 위해서 필요한 vecter에 일종인 plasmid DNA분리하는 방법을 알아보자

실험원리

플라스미드란 박테리아와 다른 유기체에서 발견되는 DNA이다. plasmid는 숙주세포 염색체와 무관하게 복제할수 있다. plasmid는 원형 DNA분자이면 박테리아 세포내에서 독립적으로 전재한다. plasmid는 항상하나, 혹은 그 이상의 유전자를 가지고 있으며, 이러한 유전자는 숙주 박테리아에서 나타나는 유용한 특성의 원인이다. 예를 들면 chloramphenicol이나 ampillin 같은 항생제의 독성농도에서 살수 있는 능력은 항생제에 저항하는 유전자를 가진plasmid가 박테리아에서 존재하기 때문이다. 실험실에서 항생제 저항성은 종종 선별표식자로 사용되면, 이것은 배양되는 박테리아가 특별한 plasmid를 포함하는지를 확인하게 한다.
모든 plasmid는 복제 시작점 역할을 하는 DNA 염기배열을 적어도 하나는 가지고 있기 때문에 박테리아 염색체와는 무관하게 세표내에서 다량복제될 수 있다. 더 작은 plasmid는 숙주세포의 DNA 복제효소를 이용하여 사본체를 만들지만 조금 큰 plasmid는 plasmid replication에 필요한 특별한 효소의 유전자를 지니고 있다
plasmid 중 어떤 것은 박테리아 염색체내에 자신을 삽입시킴으로써 복제를 할 수 있다. 이런한 삽입plasmid혹은 에피솜은 수많은 세포분열휴에도 이런형태로 유지가 되지만 어떤 단계에서는 독립적인 요소처럼 존재한다. bacteriophage염색체의 중요한 특징이다.

참고 자료

- 유전자 클로닝 입문 (제3판) 월드사이언스
- 일반 미생물학 실험서