[생물화학공학실험]Miniprep-결과

소개글

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목차

1. Abstract
2. Experiment
3. Results & Discussion
4. Conclusion
5. Reference

본문내용

1. Abstract
생명공학 분야에서 원하는 단백질을 얻는 것은 매우 중요한 일이다. 원하는 단백질을 얻기 위한 방법으로, plasmid DNA에 얻고자 하는 단백질을 발현하는 DNA를 주입하는 방식이 가장 널리 이용된다. 이러한 방식은 이번에 진행한 E.coli에서 plasmid DNA를 추출하는 방식인 Miniprep이 필수적으로 선행된다. 이번 실험을 통해서 Miniprep의 원리와 방식을 이해하는 것이 실험의 주된 목표이다.
Miniprep 실험은 기본적으로 S1, S2, S3 등의 buffer와 원심분리를 이용한 plasmid DNA 추출과, 전기영동을 통한 추출된 plasmid DNA의 확인 순으로 진행된다.
전기영동을 통해 측정된 이미지는 Fig 7과 같으며, 이를 통하여 이번 실험에 사용된 plasmid DNA가 supercoiled 형태를 가지며 S2 buffer의 5분 이상의 긴 시간 반응과, 불순물 제거 과정이 미흡했음을 확인할 수 있다.

2. Experiment
1) 기구 및 시약
(1) 1.5ml microtube
(2) Centrifuge
(3) Micropipette 1ml, 100μl, 1000μl
(4) Spin column, collection tube
(5) Electrophoresis apparatus
(6) Electrophoresis agarose
(7) DNA ladder, DNA loading star (6X)
(8) UV transilluminator
(9) S1 buffer
S1 buffer의 경우 EDTA, Tris buffer, RNase, Glucose로 이루어진 buffer이며, EDTA에 의한 세포벽 파괴와 RNase의 RNA 분해 촉진이 주된 역할이다. 그 외 성분은 Tris buffer는 pH 유지, Glucose는 삼투압 유지의 기능을 수행한다.

참고 자료

김명원 외 9인. “생명과학 개념과 현상의 이해”. PEARSON(2011). P186, P210-212
Jane B. Reece 외 5인. “캠벨 생명과학”. 바이오사이언스(2012). P396-412
LaboPass Protocol Book
실험노트