면역 침강 염색법 Immunohistochemistry ABCmethod

소개글

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목차

1. Purpose
2. Introduction
3. Material & Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

Purpose
쥐 배아의 정맥 혈관에 주로 존재하는 단백질 엔도 뮤신을 항원항체 결합을 이용해 면역 조직 화학 염색법을 진행한다. 면역 조직 화학 염색법 은 간접 방법과 직접 방법이 있는데, 간접방법중 Avidin-Biotin Complex 방법을 통해 엔도뮤신이 어디에 얼만큼 존재하는지 현미경을 통해 눈으로 확인할 수 있다.

Introduction
Immunohistochemistry는 특이적 항원항체 결합을 기반으로 조직이나 세포의 특정 항원의 유무와 존재 위치를 알아낸다. 첫번째로 조직 경화가 필요하다. 조직 경화 방법 중 paraffin block은 형태를 잘 보존 시키고 보관이 용이한장점이 있지만, 일부 조직에 파라핀 침투가 어렵고, 조직에 안좋은 영향을 끼친다. Frozen block은 고정과 embedding과정에 취약한 에피톱을 확인할 때 좋으나 형태 보존에 안 좋다. 따라서 본 실험은 paraffin block을 통해 진행되었다. 파라핀 절편을 만들 때 첫 번째 과정은 조직 고정으로 포르말린용액을 통해 고정하였다. 고정을 통해 세포와 조직이 수축이 일어나 항원이 밀집되도록 하며 단백질을 보호해 항원의 저하가 일어나지 않게 한다. 포르말린은 포름알데하이드로부터 만들어 지는 것으로, 4%paraformaldehyde를 이용했다. 이밖에도 glutaraldehyde, 아세톤도 존재한다. Glutaraldehyde는 아미노그룹, 방향족고리와 반응하는 dialdehyde로 실험 전 아민을 포함한 물질을 처리한다. 이후 washing을 통해 고정액을 헹군다. 다음으로 탈수 과정을 거친다. 조직 내부로 파라핀이 들어갈 수 있도록 조직내의 액체 성분을 파라핀과 잘 섞이도록 하는 과정으로 알코올을 저농도에서 고농도로 단계적으로 탈수한다. 다음으로 파라핀과 잘 섞일 수 있게 유기 용매인 xylene으로 알코올을 대체시킨다. 수분을 제거한 뒤에 바로 파라핀을 침투하지못하는 이유는 알코올과 파라핀은 섞이지 않기 때문에 파라핀과 알코올에 잘 섞이는 xylene을 써준다.

참고 자료

없음