PCR(중합효소연쇄반응) 실험 - pcr buffer 제작

소개글

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목차

Ⅰ Purpose(목적)
Ⅱ Introduction(소개)
Ⅲ Materials & Methods(실험재료 및 방법)
Ⅳ Result(결과)
Ⅴ Discussion(고찰)
VI Figures(사진, 이미지)
VII References(참고문헌)

본문내용

Ⅰ Purpose
성공적인 PCR을 수행하기 위해서는 최적의 buffer system이 필수적이다. 본 실험은 PCR reaction에서 새로운 DNA 가닥을 합성하는 역할을 하는 DNA polymerase의 최적 활성 조건을 만들어주기 위해 PCR mixture에 넣어주는 PCR buffer의 조성물 각각의 역할을 알고 몰농도에 따른 첨가량을 계산하여 이를 만들기 위해 수행되었다.

Ⅱ Introduction
1. PCR buffer의 역할
기본적으로 buffer는 더해진 소량의 산성 또는 염기성 화합물을 화학적으로 중성화하여 pH 변화를 막을 수 있는 용액을 말한다. DNA를 합성하는 데에 있어서 변성이 일어날 수 있는 단백질인 polymerase의 효율과 특이성은 pH에 민감하다. PCR buffer는 사용하는 DNA polymerase의 활성을 위한 최적의 조건을 만들어주는 buffer를 말한다. PCR buffer는 주로 Tris-HCl, KCl, 그리고 MgCl2를 포함한다. PCR buffer는 보통 10X 농도로 만들어지고 polymerase의 종류에 따라 구성이 다르다. 여기서 10X 농도는 buffer를 PCR mixture에 1:10로 희석해야함을 의미한다. 대부분의 프로토콜이 1X 농도의 final buffer를 권장하지만 1.5X 농도로 증가시키는 것이 PCR product 산출량을 올릴 수 있다.

< 중 략 >

Ⅲ Materials & Methods
Material
1. Reagents : MgCl2, KCl, TRis-HCl, DW
2. Equipments : micropipette(2-20ul, 20-200ul, 200-1000ul), tube, latex gloves
Method
1. 전체 volume이 1ml일 때 각각의 reagent가 원하는 몰농도만큼 들어가기 위해 필요한 volume을 계산한다. (이때 퍼센트 농도와 몰농도를 구하는 다음의 식을 이용한다, Fig.7)
Standard PCR buffer, 10X

참고 자료

PCR buffer 조성물의 역할
https://m.blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=nanohelix&logNo=220112098781&proxyReferer=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F
purpose of PCR buffer
http://www.eeescience.utoledo.edu/Faculty/Sigler/Von_Sigler/LEPR_Protocols_files/PCR.pdf
https://www.quora.com/What-is-the-main-function-of-a-PCR-buffer
https://www.thermofisher.com/kr/ko/home/life-science/cloning/cloning-learning-
center/invitrogen-school-of-molecular-biology/pcr-education/pcr-reagents-enzymes/pcr-component-considerations.html