아가로스겔 전기영동(Agarose gel Electrophoresis)

소개글

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목차

Ⅰ. Purpose(목적)

Ⅱ. Introduction(소개)
1. 전기영동(gel electrophoresis)이란?
2. Agarose gel
3. EtBr(Ethidium bromide)
4. Loading buffer
5. TAE buffer
6. Controls
7. 다른 종류의 전기영동법

Ⅲ. Materials & Methods(실험재료 및 방법)
1. Material
2. Method

Ⅳ. Result(결과)

Ⅴ. Discussion(고찰)

Ⅳ. References(참고문헌)

본문내용

Ⅰ Purpose
본 실험은 Agarose gel electrophoresis의 재료 및 역할과 원리를 이해하고 이를 통해 이전의 실험에서 얻은 PCR 결과를 확인하기 위해 수행되었다. 이전의 실험은 Prox1 발현 조직에 GFP를 발현하는 transgenic mouse와 wild type mouse를 교배하여 얻은 2254 mouse와 2255 mouse의 genotyping을 준비하는 단계였고, 이번 실험의 결과를 통해 genotyping을 할 수 있다. 즉 각각의 mouse가 transgene을 가지는 mouse인지 아닌지를 판단할 수 있다. Prox1 gene에 GFP를 암호화한 서열을 연결해준 transgene을 가지는 transgenic mouse의 경우, 전기영동을 한 결과를 대략 280bp의 band를 관찰할 수 있다. Wild type의 경우, GFP가 없기 때문에 band를 관찰할 수 없으며 이 결과를 토대로 genotyping을 할 수 있다.

Ⅱ Introduction
1. 전기영동(gel electrophoresis)이란?
전기영동이란 전기장을 걸어주었을 때 분자들이 이동하는 것을 이용해서 모양과 크기를 기준으로 분자들을 구분하는 실험기법이다. 분자생물학 실험에서의 전기영동은 DNA, RNA, protein 등의 분자를 전기적인 힘을 이용하여 gel에서 이동시켜 크기에 따라 분리한다. DNA의 경우 backbone의 인산기(phospate group) 때문에 전기영동에 사용되는 buffer 속에서 음전하를 띠고 있으며 전기장에 놓이게 되면 양의 전극 쪽으로 크기에 따라 다른 속도로 이동한다.
DNA 분자의 이동속도는 분자량이 작을수록 빨라지고 gel의 밀도가 낮을수록 빨라진다. 또한 전류가 약할수록 빨라지며, DNA의 분자량이 같더라도 형태에 따라 움직이는 속도가 다르다.

참고 자료

다인바이오주식회사_DNA전기영동
https://j1076.blog.me/220617005096
https://blog.naver.com/hafs_snu/221188285252
negative control
https://www.researchgate.net/post/What_does_it_mean_if_negative_control_during_PCR_also_shows_bands_on_agarose_gel
positive & negative control
QC Qualitative and Semi-Quantitative Procedures • Module 8 • Optional Content Sheet
agarose gel
https://terms.naver.com/entry.nhn?docId=4353235&cid=40942&categoryId=32308
전기영동에서의 DNA 농도 구하기
http://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=517837