[분자생물학실험]Animal Cell Culture, Cell lysis, and Protein Quantification

목차

1. 실험 이론 및 원리
가. 실험 배경
나. 실험 용어

2. 실험 기구 및 시약
가. 실험 재료

3. 실험 방법
가. 실험 과정

4. 실험 결과
가. 결과 분석

5. 토의 사항
가. 실험 고찰
나. 문제 풀이

6. 참고 문헌

본문내용

1.1. 실험 배경
실험기본장치들에 대한 이해, 세포배양, 그리고 gene과 관련한 실험을 진행해본 경험을 토대로, 특정 gene을 E.coli에 translation시켜, target gene을 복제함을 배웠다. 이 gene을 2가지 실험 방법으로 활용할 수 있음을 알 수 있다. 첫번째로는, gene 자체로만 활용하는 것이다. 그것이 바로, plasmid DNA Isolation이다. 두번째로는, gene에 의해 발현된 protein을 활용하는 것이다. 본 실험은 이와 연관된 protein isolation을 다룬다. 그리고, 추가적으로 standard curve를 이용하여 protein의 농도를 측정하는 방법도 배울 것이다.

1.2. 실험 용어
1.2.1. RIPA buffer : 빠르고 효과적인 cell lysis(세포의 용해)를 위해 쓰이며, 배양된 mammalian cell로부터 나온 protein의 solubilization(용해도가 증가하는 현상)을 가능하게 해준다. 이 때, protein의 생물학적 작용을 억제시키는 역할도 한다.
1.2.2. Bradford assay : sample안에 있는 전체적인 protein의 농도를 측정하고자 할 때 쓰이는 방법이다. 산성 조건에서 protein 분자는 Coomassie dye에 붙는데, 이 때 dye의 색이 갈색에서 푸른색으로 변한다. 그리고, 갈색과 푸른색의 차이가 최대가 되는 595㎚에서의 흡광도를 측정하고, standard curve와 비교하여 농도를 구한다.

참고 자료

SIGMA-ALDRICH. RIPA Buffer
Bio-101. Ph.D. Fanglian He(University of Pennsylvania, USA). Bradford Protein Assay.
BiteSizeBio. Dr.Nick Oswald. How SDS-PAGE Works.
SCIENCING. John Brennan. Components of Lysis Buffers.
Cold Spring Harbor Protocol. Yonsei University Library. RIPA buffer
ThermoFisher SCIENTIFIC. PMSF Protease inhibitor.
Mary Johnson. Detergents:Triton X-100, Tween-20, and Mpre
BIO-RAD. Quick Start Bradford Protein Assay Instruction Manual