Genomic DNA 추출과 중합효소연쇄반응을 통한 DNA 프로파일링
- 최초 등록일
- 2019.06.09
- 최종 저작일
- 2019.06
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목차
I. 도입
1. PCR의 기본 원리
2. PCR의 단계
3. xg를 rpm으로의 단위환산
4. DNA 추출 실험에서 에탄올의 역할
5. DNA 추출 실험에서 계면활성제의 역할
6. 실리카막에 DNA가 붙는 원리
II. 과정
III.결과 및 논의
본문내용
1. PCR의 기본 원리
PCR의 기본 원리는 연쇄반응으로서 1개의 DNA 분자로 2개의 복제본을 생성하고, 그 후로 4개, 8개 등을 생성하는 데 사용한다. 연속적으로 일어나는 배가 반응은 중합효소에 의해 수행되는데, 중합효소는 개별적인 building block을 연결해서 긴 분자 나선을 형성할 수 있는 효소이다. 이러한 과정을 수행하려면 DNA building blocks인 아데닌(A), 구아닌(G), 사이토신(C), 티민 (T)의 공급이 필요하다. 중합효소는 프라이머로 알려진 DNA의 작은 부분을 필요로 하는데, 중합효소는 여기에 새로운 나선을 만들기 위한 것으로 사용하기 위해서 긴 DNA와 building blocks를 부착시킨다. 3가지 성분이 공급되면 효소가 정확한 복제본을 만들 수 있다. 간단히 말하면, PCR은 핵산의 특정한 나선의 복제본을 다량으로 얻기 위해서 사용되는 방법이다. 또한 DNA의 특정 부분을 선택적으로 증폭시키는 수단으로 사용된다.
2. PCR의 단계
PCR은 변성(denaturation), 결합(annealing), 확 장(extension)의 3가지 주요 단계가 있다. PCR 을 이용해 DNA 단편을 증폭하기 위해서 시료를 95°C 까지 가열해서 DNA를 변성시키거나 2개의 단일 나선 DNA로 분리하는 변성단계를 거친다. 95°C 까지 가열하기 때문에 PCR증폭기의 뚜껑은 104°C까지 가열되어 뚜껑에 수증기가 맺히는 것을 방지한다. 그 다음, Taq 중합효소가 원래의 나선을 주형으로 사용해서 2개의 새로운 DNA나선을 합성한다. 이런 방법으로 원래의 DNA가 복제되고, 각각의 분자는 새로운 DNA 나선과 오래된 DNA 나선을 가지게 된다. 이 각각의 나선은 새로운 복제본을 만들 때 사용된다. 결합단계는 50~60°C 정도의 낮은 온도에서 이루어지는데, 이렇게 하면 프라이머가 각각의 상보적인 주형 나선에 교잡할 수 있게 된다. 주형에 부착된 프라이머의 새롭게 만들어진 DNA 나선을 이용해서 원래의 주형 나선과 똑같은 복제본을 만들 수 있다.
참고 자료
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