생화학실험 결과보고서 plasimid purification&단백질 전기영동

목차

1. 실험목적
2. 시약 및 기구
3. 실험방법
4. 실험결과
5. 실험토의

본문내용

1. 실험목적
- Plasmid DNA의 원형을 유지하는 구조적 특징을 이해하고, Alkaline lysis product를 이용하여 Plasmid DNA를
purification 한다.
- DNA purification을 한 후 Agarose gel 전기영동을 통해서 DNA를 크기 별로 분리하여 확인한다.

2. 시약 및 기구
1) 시약
(1) Plasmid purification
: Buffer RP (Resuspension), Buffer LP (Lysis), Buffer NP (Neutralize), Buffer WP (Washing), Buffer EP (Elution)
sample (E.coli)

(2) DNA 전기영동
: 전기영동 완충용액 (Running buffer_0.5X TAE), LE agarose, 6XDNA Loading dye, 1kb DNA ladder

2) 기구
(1) Plasmid purification
: e-tube, 마이크로 피펫, Binding column, Vortexing 기계, Centrifuge 기계

(2) DNA 전기영동
: 삼각플라스크, 마이크로 피펫, gel cast(플라스틱, 유리), 비닐장갑, 목장갑, DNA 염색시키는 유리판, 전자레인지
UV trans-illuminator, 전기영동장치,

3. 실험방법
1. DNA purification
①. 지난주에 냉장 보관한 cell pellet를 꺼내서 150L A1용액 (Resuspension solution)으로 풀어준다.
②. Voltexing을 충분히 해준다.
③. 250L A2용액 (Lysis solution)을 넣고 5회 정도 inverting 해준 다음 , 상온에서 2분 동안 방치한다.
④. 350L A3용액 (Neutralization solution)을 넣고 색이 사라질 때까지 inverting 해준다.
⑤. Micro-centrifuge로 13000rpm, 3min 돌린다.

참고 자료

없음