생화학실험자료 단백질전기영동

목차

1. 실험 목적

2. 실험 원리
1) 전기영동(Electrophoresis)
2) 전기이동도
3) Polyacrylamide gel
4) SDS-PAGE(SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)
5) Disc gel Electrophoresis (불연속성 전기영동)
6) 염색 방법

3. 시약 및 기구
1) 시약
2) 기구

4. 실험방법

본문내용

전기이동이라고도 하며, 콜로이드 용액 속에 전극을 넣고 직류 전압을 가했을 때 콜로이드 입자가 어느 한쪽의 전극을 향해서 이동하는 현상을 이용.
전기장을 띤 gel안에서 전하를 가진 분자는 각 전극으로 이동하는데, 양전하를 가진 입자는 음극으로 향하고 음전하를 가진 입자는 양극으로 향하게 된다. 이 때, 분자의 전하량이나 분자의 크기 등에 따라 이동하는 속도가 다른데 이 점을 이용하여 분리, 분석한다.
아미노산, 뉴클레오타이드, 단백질 등과 같은 전하를 띤 생체 고분자들의 성질을 연구하고 그것들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 수단으로 이용된다. 확연한 분리를 나타내어 단백질을 분리할 수 있을 뿐만 아니라 눈으로 확인할 수 있으며 단백질의 수(polypeptide의 수)를 빠르게 측정할 수 있고 특정 단백질의 순도를 알 수 있다. 또 등전점과 대략적인 분자량 등 중요한 성질을 결정할 수 있다는 이점을 가진다.
단백질 전기영동의 기본 원리는 DNA나 RNA 전기영동의 원리와 같다. 다만, Agarose gel 대신 SDS를 이용한 Polyacrylamide gel 전기영동을 주로 이용한다는 것과, 단백질을 눈으로 확인하기 위하여 EtBr 대신 coomassie blue나 silver염색 방법을 쓰는 것 등이 다른 점이다.

<중 략>

로딩 할 때 높이 차 때문에 출발점이 다른 단백질 샘플을 최대한 가깝게 다져주는 역할을 한다.
- Stacking gel은 시료를 압축해야 하므로 Running gel보다 단백질 시료의 이동속도가 빨라야 한다. 그러므로 acrylamide 농도, 완충용액의 이온세기, pH가 running gel보다 더 낮다.
- Stacking gel의 acrylamide 농도는 주로 3~5%이고 pH는 running gel보다 pH 2 정도 낮은 pH 6.8를 주로 쓰게 된다.

참고 자료

없음