생물레포트6 Animal Cell Culture

목차

1. 실험목표
2. 실험원리
3. 실험기구 및 재료
4. 실험방법
5. 실험결과
6. 고찰(토의)

참고문헌

본문내용

- 실험목표
1) 마이크로피펫의 사용법을 익힌다.
2) 세포배양으로 통하여 세포의 성장주기를 알아보고 세포배양법을 익힌다.
3) hemacytometer을 이용하여 세포수를 세본다.

- 실험원리
• 마이크로피펫 사용방법
마이크로피펫은 용량에 따라서 네 가지 종류가 있다. 용량의 단위는 microliter ( = 1/1,000,000 liter) 사람 모양 (人) 의 그리스 문자인 lambda 라고도 한다.

이 용량은 마이크로피펫 손잡이에 붙어있는 라벨로 알 수 있다. 왼쪽으로부터 1000 microliter (이것만 파란색이고나머지는노랑색입니다), 200 microliter, 100 microliter, 20 microliter.

피펫 옆을 보면 숫자눈금이 있습니다. 붉은색 글씨가 0 또는 1000 단위 (microliter) 를 나타냅니다. 다른 숫자는 소숫점처럼 읽으면 됩니다. 따라서 왼쪽으로부터 가리키는 숫자는 각각 1.00 (x 1000) = 1000 microliter (즉, 1 ml 입니다) , 200 microliter, 100 microliter, 20.0 microliter 가 됩니다.

<중 략>

- 실험방법 ( 위의 세포계대배양, 계수방법 그대로!!)
-계대배양
1. DPBS 1ml 처리 : 세포를 세척한다.
2. 트립신 1ml 처리 : 세포 떼어내는 역할, EDTA와 트립신이 혼합 되어있는 용액을 사용, EDTA가 칼슘 마그네슘 2가 양이온 킬레이팅을 한다. 세포가 붙기 위해서 칼슘, 마그네슘과 같은 2가 양이온들을 사용하기 때문에 효율적으로 떼어낼 수 있음(세포외기질)
트립신은 세포가 바닥에 붙는데 사용한 단백질을 특이적으로 분해하는 것이 아니기 때문에 정확히 2분 30초 동안만 CO2 Incubator에 넣어둔다.
3. 미디어를 넣어 중화시키기 : 넣어준 트립신의 2배 이상을 넣어 주어야함. 본 실험에서는 1ml 트립신에 4ml
미디어를 첨가하여 중화시켜주었다. 화학적 떼기로 트립신 + EDTA용액, 물리적으로는 미디어를 뿌리면서 첨가
4. 새로운 튜브로 옮겨 담은 후 원심분리 : 1000 RPM에서 5분 동안 원심분리

참고 자료

수업 중 피피티자료
캠벨 생명과학 9판/Jane B. Reece, Lisa A. Urry 바이오사이언스 2012출판
https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B0%B0%EC%97%BD
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=426023&cid=42411&categoryId=42411
http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/hemacytometer.htm (University Of Florida)
https://search.naver.com/search.naver?where=nexearch&sm=top_hty&fbm=0&ie=utf8&query=exocytosis
http://cafe.naver.com/goondae