제한효소 처리, DNA 전기 영동

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본문내용

1.
- Restriction Enzyme Cut이란 DNA의 특정 염기서열을 인지하고 그 부분을 절단하는 생체행위를 일컫는다. 제한효소에 대표적인 예로는 Endonucleause가 있고 제거해야 할 Nucleic acid를 안쪽에서 제거하는 효소이다. 제한효소가 존재하는 이유에는 생체 내부에 있는 세포 이외에 다른 외부 세균 또는 바이러스가 침입할 경우 제거하기 위한 면역시스템이다

2.
- 절단하려고 하는 DNA(15㎕), 10X 반응완충용액(3㎕), EcoR1 Restriction enzyme(2 ㎕), Hind 3 Restriction enzyme(2 ㎕), dH2O(8 ㎕)등을 괄호 안에 쓰여있는 정량대로 먼저 DNA, buffer, 증류수를 먼저 섞고 나서 제한효소를 주입한다. 약 3초정도 원심분리를 하여 반응할 재료들이 바닥에 모이게 하고37도의 최적의 온도에서 적당 시간 반응시켜 DNA가 충분히 절단되도록 한다.

참고 자료

Campbell Biology 9th edition, Chap 20, 2011.
Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd edition). 2001.
New England BioLab website (www.neb.com)
Wikipedia