Plasmid DNA Isolation 실험-예비,결과,레포트,보고서

목차

1. 실험의 목적
2. 사용 시약 및 기구
3. 실험방법 및 실험방법에 대한 고찰
4. 실험 결과 및 고찰
5. 참고사항

본문내용

1. 실험의 목적

- 형질전환된 E. Coli 내에 있는 플라스미드 DNA를 분리해 낸다.
- 플라스미드 DNA에 대한 이해와 Kit를 사용한 분리 정제법을 배운다.
- E Coli를 배양 후, Plasmid DNA를 추출하고 Nano Drop (Spectrometer)으로
농도를 측정한다.

2. 사용 시약 및 기구

a. 시약
Bioneer AccuPrep Plasmid Extraction Kit(K-3030-1)
Resuspension buffer (RS), Rnase A powder, Lysis buffer(BL),
Neutralization buffer(NE), Denaturation buffer(DE), Elution buffer(E)
DNA-binding column tube, 2ml tube for filtration, 1.5ml tube for elution
Absolute ethanol
얼음
b. 기구
Microcentrifuge tube (1.5 mL)
Table-top microcentrifuge 10,000 x g (13,000 rpm)
thermal block
c. 준비
· Resuspension buffer에 RNase A powder 를 넣는다. (15ml/1.5mg)
· Denaturation buffer에 에탄올을 섞는다.(18ml/ 10.8ml)
· 80%(v/v) Ethanol 준비
· Elution buffer는 용리 효율을 높이기 위해서 60℃로 예열하여 놓는다.

3. 실험방법 및 실험방법에 대한 고찰

① 세균에서 plasmid DNA를 분리하려면 먼저 세포를 많이 키워야 한다. 배양접시에 자란
colony를 멸균한 이쑤시개로 picking하여 shaking incubator에서 하루밤동안 배양한다. 이 액체 배지에는 ampicillin이 함유되어 있다.

② 배양액체배지 1.5 ml를 micro-centrifuge tube에 옮겨 담고 1분간 상온에서 12,000 rpm으로 원심분리한다.

참고 자료

두산백과
생명과학대사전, 강영희, 도서출판 여초, 2008.
과학용어사전, 현춘수, 뉴턴코리아, 2010. 4. 14.
농업용어사전, 농촌진흥청
해양과학용어사전, 한국해양학회, 아카데미서적, 2005. 10. 17.
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위키백과,
https://ko.wikipedia.org/wiki/%EB%B0%95%ED%85%8C%EB%A6%AC%EC%98%A4%ED%8C%8C%EC%A7%80
산업응용미생물학, Michael J. Waites 외 3명, 라이프사이언스, 2006, 7, 5.