1. SDS-PAGE 예비

목차

1. 실험 날짜
2. 실험 인원
3. 실험 기구 및 시약
4. 실험 목적
5. 실험 원리
6. 실험 방법
7. 실험 주의사항

본문내용

3. 실험 기구 및 시약 :
- 완제품-
30% Acrylamide, 1.5M Tis-HCl Buffer(pH 8.8), 0.5M Tris-HCl Buffer(pH 6.8), TEMED, 염색용액, 10X Tris/Glycine/SDS Buffer,2-mercaptoethanol, 2X Laemmli sample Buffer, Ammonium persulfate, 10% SDS(w/v), protein ladder

-직접제조-
10% APS(w/v) in DW: 0.5mL 제조
1X Tris/Glycine/SDS Buffer: 1000ml 제조 (10X 희석)

4. 실험 목적 : 일반적으로 원하는 단백질의 존재를 확인하기 위해 사용하는 방법으로 본 실험에서는 우유속의 단백질을 그 종류와 분자량(크기), 농도에 따라 분리하는 전기영동을 통해 확인한다.

5. 실험 원리 : 가장 간단하게 SDS-PAGE의 구동 원리를 설명하는 방법은 polyacrylamide로 이루어진 gel(그물망 형태)의 사이를 꼬불꼬불한 단백질들이 통과하는 것이다. 이 때 SDS라는 물질의 도움을 받아 단백질 시료에 음이온이 형성된다.
단백질 시료가 음이온을 띄어야하는 이유는 SDS-PAGE에 사용되는 두 종류의 gel이 갖는 특성 때문이다. SDS-PAGE는 기본적으로 running gel과 stacking gel로 구성된다. Stacking gel은 실험하고자 하는 단백질 시료가 모두 로딩 될 때 까지 시료들이 젤의 틈을 따라 흘러 내려가지 못하도록 붙잡아두는 역할을 하는 중요한 물질이다.
즉, 출발점이 다른 샘플들이 최대한 같은 높이에서 전개될 수 있도록 해주는 것이다. 그래야 같은 높이에 같은 분자량의 단백질이 나타나고 그 크기를 더욱 자세히 유추할 수 있기 때문이다.
하지만 이러한 역할보다 더욱 중요한 것은 pH이다. Stacking gel은 하단의 running gel보다 pH가 낮다.

참고 자료

한국생화학회, “실험생화학”, 3판, 탐구당, 1993
화악용어사전편찬회, “화학용어사전”, 일진사, 2006