유전학실험레포트

목차

1. Plasmid DNA prep
2. Agarose gel ELECTROPHORESIS
3. Bacterial transformation
4.염색체관찰 – mitosis

본문내용

▸Mini prep : prep은 prepartion의 줄임말로 DNA를 소량 추출한다는 의미이다. 세균의 cell wall과 cell membrance을 부수고 plasmid DNA만을 분리하는 것이다. chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리한다. 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하기 어렵다. chromosomal DNA는 분리과정에서 linear 형태이며 크기가 비교적 크다는 성질을 이용하면 쉽게 분리할 수 있다.
▸Alkaline lysis : Alkali를 이용하여 plasmid DNA와 chromosomal DNA간의 구조적 차이에 plasmid DNA만을 분리한다. 적은 양의 DNA를 분리할 때 쓰인다. Bacteria는 sodium dodecyle sulfate(SDS), NaOH(alkali)를 함유하는 용액으로 처리한다. SDS는 bacterial proteins을 변성시킨다. NaOH는 chromosomal DNA와 plasmid DNA 염기쌍의 수소결합을 파괴하여 이중나선 구조를 분리(denaturation)시킨다. potassium acetate을 가하여 중화시키면 공유결합으로 연결되어 있는 super coiled DNA plasmid는 다시 이중나선 구조로 결합(renaturation)되어 상층액에 남으나, linear의 DNA plasmid와 protein은 potassium과 SDS간에 형성되는 complex에 갇혀 침전된다.
▸HB101 : E. coli의 strain 중 하나로 E. coli K-12와 E. coli B의 교잡주로 DNA 치환 기술로 유전자 DNA cloning시 벡터의 숙주로서 사용된다. Streptomycin에 저항성이 있다.
▸Plasmid vector : 대장균이 약제내성을 획득하는 기구의 하나인 플라스미드를 응용한 벡터(매개자)이다. pBR계와 pUC계가 가장 잘 이용되고 있다. 플라스미드는 약제내성의 표지와 복제부위를 갖고 있어서 대장균에 도입하여 형질전환하여 약제내성을 가진 콜로니를 얻는다.

참고 자료

없음