(생화학 실험보고서) DNA 클로닝

소개글

연구대상의 DNA절편을 PCR을 통해 증폭시켜보고 DNA 재조합 기술을 이용해서 DNA 클로닝을 실습한다. 그런 뒤 alkaline lysis를 이용해서 plasmid DNA를 분리시켜 보고 최종적으로 실험이 제대로 이루어졌는지 확인하기 위해 전기영동을 해본다.

목차

1. 실험일자

2. 실험목적

3. 서론
(1) PCR
(2) DNA 클로닝
(3) plasmid preparation
(4) 전기영동

4. 실험방법
(1) PCR
(2) Ligation
(3) Transformation&Seeding
(4) Plasmid preparation
(5) Electrophoresis

5. 실험결과

6. 고찰

7. 참고문헌

본문내용

1. 실험 일자 – 10/13, 10/20

2. 실험 목적
- 연구대상의 DNA절편을 PCR을 통해 증폭시켜보고 DNA 재조합 기술을 이용해서 DNA 클로닝을 실습한다. 그런 뒤 alkaline lysis를 이용해서 plasmid DNA를 분리시켜 보고 최종적으로 실험이 제대로 이루어졌는지 확인하기 위해 전기영동을 해본다.

3. 서론
(1) PCR(중합효소 연쇄반응)
- PCR은 DNA 절편을 엄청난 양으로 증폭시킬 수 있는 연구방법이다.
우선, 간략하게 방법을 설명하면 PCR은 3단계로 이루어져 있다.
➀ Denaturation - DNA가닥에 열을 가해서 두가닥을 한가닥으로 분리시킨다.
➁ Annealing - 증폭하고자 하는 부분 양 끝에 짧은 합성 DNA primer를 충분히 결합시킨다.
➂ Elongation - DNA 중합효소에 의한 중합반응에 의해 5`에서 3`방향으로 새로운 DNA가 합성된다. 풀어서 설명을 하면 다음과 같다.

풀어서 설명을 하면 다음과 같다.
PCR은 DNA주형을 사용해서 디옥시리보뉴클레오타이들로부터 DNA가닥을 합성하는 DNA중 합효소에 의존한다. 새로운 가닥이 합성되는 과정에서 디옥시리보뉴클레오타이드의 인산기가 3`의 OH기를 공격을 해서 phosphodiester bond를 형성한다. 즉, DNA합성이 시작되기 위해 서는 디옥시리보뉴클레오타이드 앞에서 3`의 OH기를 제공하는 무언가가 필요하다. 이것이 primer의 역할이다. 증폭될 단편의 끝 바로 옆의 위치에서 표적DNA의 양쪽가닥 서열에 대해 각각 상보적인 2개의 올리고뉴클레오타이드를 합성한다. 올리고뉴클레오타이드는 primer로 작용하게 되고 3`끝이 서로 마주보는 방향으로 삽입되기 때문에 DNA조각을 가로 질러서 합 성이 일어나게 된다. 따라서 PCR은 기본적으로 증폭시킬 DNA를 포함하는 DNA시료, 한 쌍의 합성된 올리고뉴클레오타이드 primer, dNTP, DNA중합효소 이 4가지를 필요로 한다.

참고 자료

Nelson David L 외, 레닌저 생화학 (6판), 월드사이언스, 2014, p92~94, p314, p327~328