[분자생물학실험] PCR

목차

1. Summary
2. Keywords
3. Introduction
4. Materials & Methods
5. Reference

본문내용

Summary
PCR은 Denaturation, Annealing, Elongation의 3단계를 거친다. Denaturation은 높은 온도를 이용하여 이중가닥 DNA(dsDNA)를 단일가닥 DNA(ssDNA)로 분리시킨다. Annealing은 50℃~65℃에서 진행된다. Primer가 자신의 염기서열과 상보적인 염기서열을 갖고 있는 DNA에 결합하는 단계이다. Elongation은 Taq polymerase를 이용하여 target DNA template과 상보적인 DNA 가닥을 합성하는 단계이다. 여기서 Taq polymerase는 Termusaquaticus라는 온천에서 사는 세균에 존재하며, 열에 대한 저항성이 강한 효소이다. 우리는 PCR을 이용하여 cDNA의 양을 증폭시킬 수 있었는데 30cycle을 돌리게 되면 230개의 cDNA를 얻을 수 있다. 우리는 이렇게 해서 얻은 결과를 electrophoresis를 이용 정성을 하고 O.D를 구해 정량을 구하였다. 전기영동 결과로는 4조를 제외한 각 조마다 약 300bp, 약 600bp의 band를 구함으로써 DNA template 종류를 2종류를 사용하였음을 알 수 있었고, 우리 1조의 경우는 그 정량값이 Control은 1563.5, Reaction mixture는 1604.0의 농도임을 알 수 있었다. 그리고 두 종류 다 1.65의 purity를 나타냈는데 그 이유는 RT-PCR시 이용했던 buffer, enzyme, dNTP, Oligo dT primer도 들어있기 때문이다.

Keywords
PCR / Taq polymerase/ DNA template

Introduction
중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복, 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법이다. 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이다.

참고 자료

http://ko.wikipedia.org/wiki/%EC%A4%91%ED%95%A9%ED%9A%A8%EC%86%8C_%EC%97%B0%EC%87%84_%EB%B0%98%EC%9D%91
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_2.htm
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_08.php
Robert F. Weaver 분자생물학 (2판) / 박상대 역자 / 라이프사이언스 / p67