Cloning and Vector -Gateway cloning system

소개글

Cloning and Vector -Gateway cloning system 에 대한 레포트 입니다.
gateway cloning에 대한 내용과 실험 방법 결과입니다.

목차

1. Topic
2. Aim
3. Background
4. Materials & Methods
5. Results
6. Discussion
7. Reference

본문내용

1. Topic
Gateway cloning system 의 원리를 알아보고 실험으로 적용해 보았다.

2. Aim
protein expression 이나 DNA fragment 의 cloning, gene 의 분석에 사용되는 gateway cloning system 을 사용해보고, 다른 방법과 어떻게 다른지 알아보았다.

3. Background
Gateway system 에서 clonase 에 의해 잘려지는 부위가 존재하며, attB1 을 갖고 있는 expression vector 는 attL1, attL2 를 갖는 vector 와 attR1, attR2 를 갖는 vector 와의 반응으로부터 온다. Enzyme 는 위의 att1 GTACAAA 와 att2 CTTGTAC 의 부위를 잘라내지만, 그 이후의 attB 의 21bp sequence 에는 영향을 주지 않는다고 한다. Entry clone 을 만드는 법은 여러가지가 있다. 우리가 이번 실험에서 진행한 BP reaction 을 통한 cloning 방법, Topo directional vector 를 이용하는 방법, restriction enzyme 을 이용하는 법, premade clone 을 이용하는 법, custom service 를 이용하는 법 등이 있다.

참고 자료

El Mustapha Bahassi, Mary H. O’Dea, Noureddine Allali, Joris Messens, Martin Gellert, and Martine Couturier. < Interaction of CcdB with DNA gyrase- Inactivation of GyrA, Poisoning of the Gyrase-DNA Complex, and the Antidote action of CcdA>.1999. The Journal of Biological Chemistry, 274, 10936-10944.
Sevin EW, Barloy-Hubler F.,2007. <RASTA-Bacteria: a web-based tool for identifying toxin-antitoxin loci in prokaryotes>. Genome Biol. 8 (8): R155.
Bernard P, Couturier M. August 1992. <Cell killing by the F plasmid CcdB protein involves poisoning of DNA-topoisomerase II complexes>. J. Mol. Biol. 226 (3): 735–45.
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Center for Brain Science. Brainbow. Livet et al. Nature.2007. http://cbs.fas.harvard.edu/science/connectome-project/brainbow