Cloning and Vector Restriction enzyme and digestion.

소개글

Cloning and Vector Restriction enzyme and digestion 에 대한 레포트 입니다.

실험 원리 및 결과에 대한 레포트입니다.

목차

1. Topic
2. Aim
3. Background
4. Materials & Methods
5. Results
6. Not1 과 EcoR1 처리한 GFP 의 sequence 와 amino acid sequence
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Topic
Restriction enzyme and digestion.

2. Aim
Mini-preparation 실험에서 분리했던 plasmid DNA 의 농도와 크기를 확인하기 위해 restriction enzyme 을 처리하여 electrophoresis 를 하였다. 결과를 통해 잘려진 크기와 개수를 구분해보았다.
GFP 의 amino acid sequence 를 알아보고, 원하는 enzyme site 에 집어넣기 위해 primer 를 예측해본다.

3. Background
1) DNA staining 원리.
ETBR 으로 염색한 DNA 는 가시광선에서 보이지 않으므로 uv light 아래서 볼 수 있다. Xylene cyanol 과 bromophenol blue 는 보통 자주 쓰이는 dye 로 DNA fragment 들과 같은 속도로 달린다. 이는 보통 5000bp 부터 300bp 까지에서 사용한다. 이것보다 작은 125bp 에서 50bp 는 cresol red 나 orange G 를 이용해서 쓴다고 한다(1).

참고 자료

Muhittin Yilmaz, Cem Ozic and Ilhami Gok. <Principle of Nucleic Acid Seperation by Agarose Gel Electrophoresis>. University of Kafkas, Department of Biology, Faculty of Science,kars,Turkey. pp.35 ~ 38.
A Thermo Fisher Scientific Brand. Life Science. DNA&RNA 정제및분석.DNA Ladders. http://www.lifetechnologies.com/kr/ko/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/nucleic-acidgel-electrophoresis/dna-ladders/dna-size-markers-mass-ladders.html
Webcutter2.0. pEGFP-N1 의 sequence. Circular form. http://rna.lundberg.gu.se/cgi-bin/cutter2/cutter
translation of pEGFP-N1 –Not1,EcoR1. http://web.expasy.org/translate/
Primer that match your vector. pEGFP-N1. http://sequetech.com/primers.php
http://sequetech.com/cgi-bin/DisplaySequence.pl?PN=GFPreverse&PS=CGTCGCCGTCCAGCTCGACCAG
http://sequetech.com/cgi-bin/DisplaySequence.pl?PN=EGFP-Cnew&PS=CATGGTCCTGCTGGAGTTCGTG