미생물학 실험 Mini-Preparation of Plasmid DNA 레포트
- 최초 등록일
- 2017.06.28
- 최종 저작일
- 2017.05
- 8페이지/
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목차
1. Title
2. Purpose
3. Principle
4. Materials
5. Method
6. Result
7. Discussion
8. Referernces
본문내용
Purpose E.coli에서 plasmid DNA를 mini-prep이라는 기술을 이용하여 추출하고, 그 결과를 흡광도 측정을 통해 알아본다.
Principle
*Plasmid DNA Preraration
-정의: DNA 재조합에 필요한 Vector를 모으기 위해 박테리아 안에서 증폭된 plasmid를 추출하는 것.
-원리: chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고, 크기가 크기 때문에 성질의 차이 이용.
-크기: Chromosomal DNA > Plasmid DNA
-방법: 1. Growth f E.coli culture.
2. Harvestng and lysis of E.coli cells.
3. Plasmid DNA의 정제.
+이번 실험에서 사용한 분리방법: Alkali lysis 방법
*Plasmid puriffication(정제): Alkali lysis
-가장 보편적으로 사용되는 방법.
-3가지 solution을 사용함.
+정제: 어떤 물질로부터 혼재해있는 불순물을 제거하여, 순도를 높이는 조작.
*Plasmmid DNA 분리 용액 구성
1.solution1(세포 현탁 용액): 세포벽 파괴, 삼투압을 유지시켜 세포 외형 유지.
2.soiutuon2(세포용해 용액): 세포막을 깨고 PH를 높여 변성시킴.
3.solution3(중화 용액): 중화단계, PH를 낮춰 재생시킴.
*cDNA(Chromosomal DNA)
:cDNA는 genomic DNA이며 모든 생물이 가지고 있는 DNA이다. 필요한 유전정보를 가지고 있으며 genomic DNA가 없으면 생존할 수 없다.
*실리카흡착법
-정의:실리카레진이 핵산과 서로 결합하는 원리는 이용하여 정제하는 방법.
-원리: 고농축의 염 용액 하에서 positive ion bridge를 형성해 negative charge의 silika와 결합.
*Chromosomal DNA 정제과정.
1.세포 용해
2. 단백질과 RNA 제거
3. DNA 농축
4. 분리된 DNA 양과 순도 측정
참고 자료
Cambell Biology, 9th edition, Reece, Urry, Cain. 20장 유전학
http://blog.naver.com/suruk/220178288276 mini-prep 실험과정
http://blog.naver.com/jini10045?Redirect=Log&logNo=60107047239, 꿈의 소녀 블로그,
http://en.wikipedia.org/wiki/CDNA_library, 위키피디아
