TNF signaling 실험 결과레포트

목차

Ⅰ. Introduction

Ⅱ. Material & Method
2.1 Cell lysis for protein preparation.
2.1.1 Total lysate sampling.
2.1.2 Nuclear fractionation.
2.2 Protein quantification. (Bradford methods)
2.3 SDS-PAGE
2.4 Western blotting
2.5 2-Dimensional electrophoresis
2.5.1 IPG(Immobolised pH gradients) rehydration.
2.5.2 Isoelectric focusing.
2.5.3 Making the Gel.
2.5.4 IPG gel strips equilibration.
2.5.5 Embedding
2.5.6 Gel running

Ⅲ. Result
3.1 Cell lysis for protein preparation & Protein quantification (Bradford methods).
3.2 SDS-PAGE & Western blotting
3.3 2-Dimensional electrophoresis & Western blotting

Ⅳ. Discussion
4.1 결과가 잘 나오지 않았던 실험에 대해
4.1.1 Nuclear CTL sample과 Nuclear 1h sample
4.1.2 2-Dimensional electrophoresis & Western blotting의 1h sample.
4.2 Further study
4.2.1 2-Dimensional electrophoresis 결과를 이용한 추가 실험
4.2.2 Therapy로의 응용

Ⅴ. Reference

본문내용

Abstract
이번 실험에서는 TNF 유도성 apoptosis와 NF-κB의 activation을 확인 해 보고, 그 외에도 proteomics 기법을 통하여 단백질의 발현 및 localization의 변화를 확인 해 보았다. 첫 번째 실험에서는 배양 중인 cell에 TNFα를 각각 1h, 2h씩 처리하여 lysis후, 각 fraction(Total, Cytosol, Nuclear)에서 원하는 protein을 분리하여 SDS-PAGE와 western blotting의 과정을 통해 TNFα 처리에 따른 protein들의 발현 및 localization의 변화를 관찰하였다. 두 번째 실험에서는 마찬가지로 TNFα를 처리한 cell을 lysis하여 2-Dimensional electrophoresis를 이용하여 단백질을 고유의 PI 값과 mass에 따라 분리하고, O-GlcNAc antiboby를 이용하여 분리된 단백질의 O-GlcNAc modification의 변화 과정을 western blotting을 통해 확인하였다. 이러한 실험을 바탕으로 TNF signaling에 관여하는 새로운 단백질을 찾아볼 수 있을 것이다.

Ⅰ. Introduction
Tumor Necrosis Factor receptor (TNFR) superfamily는 현재까지 32 member와 19 ligand가 알려져 있으며, 이를 구성하는 receptor에 의한 signaling은 inflammation으로부터 programmed cell death라 불리는 apoptosis까지 다양한 영역의 biological outcome을 매개한다. 대표적으로, lymphoid organ development, acute inflammation, lymphocyte costimulation 등의 다양한 면의 immune cell function을 조절한다. 이는 각각의 receptor를 통해 자극되는 반응의 다양성에 기인하는데, 이러한 receptor에 대한 signaling은 cell type과 환경적인 요소에 의존하게 된다.

참고 자료

http://www.nature.com/nri/journal/v9/n11/fig_tab/nri2655_F1.html
생물학실험 (2) Part B 레이아웃
http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=354&docId=433076&mobile&categoryId=354
http://terms.naver.com/entry.nhn?cid=359&docId=424204&mobile&categoryId=359
http://blog.naver.com/mandu96?Redirect=Log&logNo=130042113459