[실험프로토콜] IHC (ImmunoHistoChemical Staining) - Xylene

소개글

Xylene을 이용하여 탈파라핀한 후 IHC하는 방법입니다.
DAKO 브랜드의 시약을 이용하였고 처음 하시는 분들도 쉽게 따라할 수 있게끔 그림으로 나타냈습니다.

목차

1. Material
2. Method
3. Next Day
4. Reference

본문내용

First day
1. 파라핀을 녹임.
- Dry oven 이용
- Slide warmer 이용
2. Deparaffinization (탈파라핀) & rehydration.
- Paraffin에 붙어 있는 조직을 xylene을 이용하여 paraffin은 녹임.
- Paraffin을 제거하고 수분을 공급하여 염색을 할 수 있는 조건을 만드는 것.
- %가 낮을수록 수분을 넣어줌, 조직에 물기를 넣어주는 작용.
- 최종단계는 당연히 물.
- 모든 단계를 지날 때 마다 담궜다가 빼는 것을 10번 정도 반복한 후, buffer
을 확실히 제거 후에 buffer을 바꿈. (up&down)
- 시간이 없으면 단축 가능 2-3min.
① Xylene 1 5min.
② Xylene 2 5min.
③ Xylene 3 5min.
④ 100% Ethanol 1 5min.
⑤ 100% Ethanol 2 5min.
⑥ 100% Ethanol 3 5min.
⑦ 95% Ethanol 5min.
⑧ 90% Ethanol 5min.
⑨ 80% Ethanol 5min.
⑩ 70% Ethanol 5min.
⑪ D.W. 10min. (tap water)
- 10번째 or 11번째 과정에서 미리 준비.
① 전기밥솥 전원 on.
② Keep warm start.
4. D.W로 5min washing.
- Slide를 rack에 꽂은 채로 물이 채워져 있는 물통에 수돗물로 조금씩 흘려서 washing.
5. Antigen Retrieval. (in cooker)
① 전기밥솥에 물(수돗물) 250ml을 넣어줌.
② 1X Dako Target retrieval solution 50ml을 전용 tube에 넣어줌.
- 10X Dako Target retrieval solution → 1X Dako Target retrieval solution
: 10X solution 5ml + D.W 45ml → 1X solution 50ml
③ Slide를 전용 tube 안에 넣고, 압력에 터지지 않게끔 뚜껑은 한 바퀴 정도
덜 닫음.
④ High pressure로 15min.

참고 자료

없음