[실험프로토콜] MTT를 이용한 cell viability측정
- 최초 등록일
- 2016.10.20
- 최종 저작일
- 2016.09
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어도비 PDF
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소개글
MTT를 이용하여 viability를 측정하는 방법입니다.
파워포인트를 이용하여 그림으로 간단하지만 자세히 설명되어 있습니다.
흡광도는 Softmax pro 5.4f으로 측정하였는데, 그 프로그램에 대한 설명 또한 자세히 나타냈습니다.
목차
1. Materials
2. Method
3. Next day
4. Using Materials (machine & accessory)
5. Viability
본문내용
Materials
- 100Φ dish에 있는 cell
- New Media (FBS+/ PS+)
- 1XPBS
- Trypsin (+Phenol red)
- Trypan blue stain (0.4%)
- MTT
- DMSO
- 24well
- 96well
- 15ml Conical tube
- 50ml Conical tube (media & 1XPBS 분주해 두는 용)
- cell counting slide
- foil
- Aid / Aid tip (10ml)
- Pipette / pipette tip
- Clean bench
- Microscopy
- Centrifuge (15ml conical tube 용)
- Suction기기
- CO2 incubator
- Cell counter
- microplate reader
- Shaker
- Excel : microsoft office excel
- Softmax pro : Softmax pro 5.4
Method
1. 24well에 cell subculture.
2. 해당 시간 후 cell 상태확인.
3. Media제거. (washing X)
4. 24well 에 MTT reagent 300ul를 넣음.
- MTT reagent : 호일에 conical tube를 싸서 사용 & 보관 (4℃)
- MTT stock : 5mg/ml
- MTT working : 0.5mg/ml (stock 10배 dilution : media (+/+) 45ml + MTT stock 5ml)
5. Plate를 호일에 싸고 37℃ CO2 incubation 3-4hours.
6. MTT 제거 후 DMSO 200ul를 넣음.
7. 살아있는 cell이 많을수록 진한 보라색.
8. 제일 많이 죽은 cell well의 색을 보고 DMSO양을 결정.
9. 손을 흔들고 툭툭 쳐서 DMSO에 cell을 녹임.
- 손으로 툭툭 치지 않아도 cell이 녹아지기에 굳이 치지않아도 됨.
참고 자료
없음