생명과학실험 레포트6 Specific activity enzyme kinetics

목차

Ⅰ. 실험 일시
Ⅱ. 실험 목표
Ⅲ. 실험원리
Ⅳ. 실험 재료
Ⅴ. 실험 방법
Ⅵ. 실험 결과
Ⅶ. Discussion
Ⅷ. 참고문헌

본문내용

Ⅰ. 실험 일시
2013 / 5 / 3 (금) 3:30pm ~ 5:30pm ~ 2013 / 5 / 10 (금) 3:30pm ~ 5:30pm

Ⅱ. 실험 목표
효소의 활성을 흡광도를 이용하여 측정하는 방법과 specific activity 의 개념을 이해하고, 효소반응속도론 (enzyme kinetic) 에서 기본이 되는 Michaelis - Menten equation 과 Lineweaver - Burk equation 을 이용하여 효소활성의 척도가 되는 Michaelis constant (Km), 최대속도 (Vmax), turnover number (Kcat) 등을 실험적으로 측정할 수 있다.

Ⅲ. 실험원리
- Spectrophotometer (분광광도계)
일반적으로 빛이 물체와 만나면, 빛은 물체의 표면에서 반사되거나 물체에 흡수되거나 물체를 통과하게 된다. 이 중 빛의 흡수현상을 이용하여 시료 용액 중의 빛을 흡수하는 화학물질의 양을 정량할 수 있다. 주로 자외선이나 가시광선 영역에서의 빛의 흡수되는 정도를 측정하는데 빛이 시료를 통과하게 되면 일부 흡수되기 때문에 빛의 광도가 달라짐을 이용한다. 물체에 흡수되는 빛의 양은 흡광물질의 농도마다 다르기 때문에 흡광도를 통해 흡광물질의 농도를 알 수 있다. 비어의 법칙 (Beer's law) 에 따라 흡광도 A (Absorption) 는 물질의 흡광계수 ε, 물질의 농도 c, 용액을 빛이 통과한 거리 ℓ 에 비례한다.

- Bradford assay (단백질정량)
Bradford Assay 는 UV Spectrophotometer 를 이용, 흡광도를 측정하여 standard 물질인 BSA 를 기준으로 자신의 시료에 단백질이 얼마만큼 들어있는지 측정하는 방법 중 하나이다. 이 방법은 신속하고 간편하게 단백질을 정량할 수 있어 널리 쓰인다. Dye 로는 Bromophenol Blue 를 사용하며, 이 dye 가 단백질과 결합해 생기는 파장의 변화를 측정한다. 단백질의 정량을 위해서는 standard 가 필요한데, BSA 를 이용해 standard curve 를 얻을 수 있다.

참고 자료

생물학 실험서, 라이프 사이언스, 민철기, 강창수
단백질실험노트 (하), 월드사이언스, 김승호, 장규태
실험생화학, 월드사이언스, 김승호, 장규태
Wikipedia - PNPP, PNP
레닌저의 생화학, 월드사이언스, Nelson