cDNA 합성과 REAL - TIME PCR

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1. 서론
☞ Real-time PCR
일반적인 PCR은 증폭 이후 전기영동(electrophoresis)으로 결과를 분석하게 되는데, 전기영동은 민감도나 해상도가 낮기 때문에 정량적인 분석이 어렵다. 무엇보다도 PCR 반응이 끝난 후에 분석되기 때문에 초기 투입된 template DNA의 양을 확인할 수가 없다.
이러한 전기영동의 단점을 보완한 기술이 real-time PCR이다.
Real-time PCR에서는 PCR 산물의 양이 각 cycle 마다 측정되어 증폭 과정을 실시간 모니터링 할 수 있으며, 보고자 하는 유전자의 최초의 양을 정확하게 확인할 수 있다. 또한, real-time PCR은 tube가 닫혀있는 상태로 결과를 바로 분석하기 때문에 오염률도 낮고, 형광 검출 방식이기 때문에 짧은 시간 안에 결과 분석이 가능하다. 또 PCR 이후 다른 조작이 필요 없어 간편하게 자동으로 신속한 결과를 얻을 수 있다.
Real-time PCR에서는 5'말단에는 형광물질인 reporter가 결합되어 있고, 3'말단에는 상쇄물질인 quencher가 결합된 형태의 oligo-nucleotide(Taqman probe)가 사용된다.

참고 자료

http://blog.naver.com/sanigen/220629827028

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