KO mouse에 관해서(울산대 A+ Report)
- 최초 등록일
- 2016.06.27
- 최종 저작일
- 2016.04
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목차
없음
본문내용
3. Founder screening ,
-대리모에 착상 후 20일이 지나 태어난 새끼들의 tail에서 genomic DNA를 뽑아 PCR을 이용하여 founder screening을 한다
4.Breeding과 Germline Transmission ,Expression확인
- 5~6 주 정도 되면 wildtype 생쥐와 교배를 하여 다음 세대로의 transgene 전달이 일어나는 지 확인 한다.
5.transgenic mice의 표현형 분석을 통해 유전자의 기능을 규명
① 재조합 벡터에 파괴하려는 유전자를 클로닝
②이 유전자의 중간에 NeoR,옆에는thymidine kinase를 삽입
③이 벡터를 배아 줄기 세포에 넣은후geneticin(G418)과 ganciclovir를 투여한 배지에서 키움
④NeoR를 지니면서 동시에 thymidine kinase는 지니지 않기 위해 염색체 DNA와 상동 재조합을 일으키게 됨
⑤ 상동재조합이 일어나 특정 유전자가 파괴된 배아 줄기 세포를 다른 포배기 배아에 넣어 대리모에 착상하면 chimera mouse를 얻을 수 있음
⑥ 이후 몇번의 교배과정을 거쳐 특정 유전자가 파괴된 생쥐를 얻어 그 표현형을 분석함
참고 자료
Principles of Biochemistry, Lehninger, fourth edition
생명과학실습 1, 이화여자대학교 생명과학전공, p13~17
http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/western%20blotting.htm
http://biopedia.org/index.php/Western_Blotting